大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究.pdfVIP

； （） 生物化学与生物物理进展 · · ## #$ ! %’( ) *+’,-./ ) *+’0-12 ) !$! 大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究 ，） ） ） ） ! ! 徐卉芳 张先恩 张治平 张用梅 !） ） （中国科学院微生物研究所，北京 !###$# ； 中国科学院武汉病毒研究所，武汉%##’!） ( ) * ) + ) ,(-- （ ， ， ， ， ， ） !#$%’()*+ ,-.*)’/) 0’-*.1 2#113 #4 5$/$ 6$%/#1#3+ ./7 87$/ 5#9)% :/(/3)#/ ;#/7#/ 5’ = ./ 摘要 大肠杆菌碱性磷酸酶 （ ， ， ）是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶 ? @ $#16789670:095 *(; *, ! ! ) 采用易错聚合酶链反应 （ ）的方法，在原有高活力突变株的基础上，对 远离活性中心催化三 5==8= 6=845 ;, *(; 联体的区域进行定向进化，经两轮 ，获得催化活力较亲本 突变株提高 倍、较野生型酶提 5==8= 6=845 ;, ?!#!- 高 倍的进化酶 ，并对该酶的催化动力学特征进行了分析 进化酶基因的 测序表明 含两个有义 @ %A!$B ) ?C( %A!$B 氨基酸置换：/!B’ 和-’%,，二者既不位于底物结合位点，也不位于酶的金属离子结合位点) 关键词 定向进化，易错聚合酶链反应，大肠杆菌碱性磷酸酶，催化活力 学科分类号 D@$，D$! 近年来，以连续易错聚合酶链反应 （ 经对不同来源、不同催化活力的 氨基酸序 5==8= 6=845 (; ［］ ）和 改组 （ ）为基础的体外 列比较表明B ：它们的活性中心序列是高度保守 ;, ?C( ?C( 97EFF134G 分子定向进化策略，为蛋白质工程的发展提供了一 的，特别是 催化三联体 因 (96!#!A