葡萄籽中一个新的11S球蛋白的提取分离纯化及结构鉴定外文翻译.docVIP

石河子大学 毕业论文(设计)外文翻译 课题名称： 鹰嘴豆中粗蛋白的制备及加工特性分析研究 学生姓名： 张玉单 学 号： 2008113392 学 院： 食 品 学 院 专业年级： 食品质量与安全专业2008级1班 指导教师： 张 建 职 称： 副 教 授 毕业论文(设计)起止时间： 2011.112012.6 葡萄籽中一个新的11S球蛋白的提取分离纯化及结构鉴定 摘要:世界上每年大约产生10万吨葡萄废渣，其中包括38-52%葡萄籽。因此，如何利用这些剩余的物质已经受到高度重视。在本文研究中，通过阳离子交换和凝胶色谱法从葡萄籽中提取分离纯化出一种11S球蛋白（GSG）。1公斤种子的蛋白质大约含10毫克11S球蛋白。GSG的分子质量大约300?kDa，由两个亚基组成，分子量分别为25.5和40.0?kDa组成。MADLI-TOF-MS的结果表明，它们不相同。?N-末端氨基酸序列测定显示40.0?kDa亚基的N末端十个氨基酸序列是RQQTSRQQKE。氨基酸组分成分分析表明，GSG包含所有八个人体必需的氨基酸，赖氨酸是第一限制性氨基酸，本文首次报道了从葡萄籽中分离纯化得到了11S球蛋白。 关键词:葡萄籽、球蛋白、分离纯化、氨基酸组成 前言 葡萄是世界上最大的一个全球性的水果作物之一，在2006年生产69万吨左右[1]。收获的几周内约总额的80％用于生产葡萄酒和果汁，出现约10万吨的葡萄皮渣。这些废物的处置构成潜在的污染问题，并伴随着宝贵的生物量和养分的损失。食物的生物转化加工剩余物正日益受到重视，这些残留的物质代表有可能利用的资源转换成有用的产品。在这种情况下，水果的废物利用加工作为一个功能性成分的来源是有前途的领域[2]。 葡萄皮渣含有38-52％（干物质基础）葡萄籽，食用蛋白[3]这可能是一个潜在根源。葡萄籽的蛋白质含量从10％到13％不等。球蛋白是从葡萄属种子[4]胚乳的主要蛋白，由氨基酸组成，从葡萄籽中蛋白质的性质非常相似，谷物和其他油籽的，他们可以用这些材料代替他们作为添加剂使用食品[5]。然而，在过去几十年中对葡萄籽进行的许多研究只强调葡萄籽提取物原花青素，以及作为其生物特性，如抗氧化性能和抗辐射作用[6]。有提取和分离方法，亚基组成和结构中的glob?ulins以及其营养价值的资料很少。在这项研究中，一个新的11S球蛋白样蛋白（GSG）是从葡萄籽中提取，阳离子交换层析和使用Superdex200?prep grade凝胶过滤层析。本文还报告了GSG的N-末端氨基酸序列和氨基酸组成的表征。 材料和方法 材料 葡萄籽由天津尖峰天然产物有限公司提供，所有的化学试剂均为分析纯。N，N-二methyleneacrylamide十二烷基硫酸钠（SDS），三羟甲基氨基甲烷（TRIS），TEMED，B-巯基乙醇，考马斯亮蓝R250均购自Sigma-Aldrich公司（中国北京）。CM-琼脂糖凝胶的快速流动和Superdex 200预备级树脂从GE医疗集团有限公司（中国北京）购买。 蛋白质纯化 约1公斤葡萄籽浸泡在蒸馏水中过夜四卷使用华林搅拌器（50?mM磷酸盐缓冲液（PBS），1％polyvinylpolypyrrolidone，pH值7.5）缓冲溶液中匀浆。浆料加热在10分钟的55?消除蛋白酶和其他热敏感蛋白质，然后在12000*9克离心分离15分钟，分离不溶性物质。上清液调整为20％（NH）SO4，存放于4℃增补为1小时（NH）2SO4终浓度为40％（W / W）。在4℃1小时后，取上清液离心12,000*9g为30分钟。由此获得的沉淀，溶解在50毫米磷酸氢二钠十二柠檬酸（N2HPO4-CA）缓冲液（pH值5.0）和三次透析对同一个缓冲区。在一个CM-琼脂糖快速流柱（26毫米*30厘米），以前在50毫米平衡的Na2HPO4-CA缓冲液，pH值5.0，阳离子交换层析进一步纯化蛋白。装订材料，然后洗脱具有相同的缓冲区，但含有1.0?M氯化钠。汇集组分含有球蛋白，透析（50毫米PBS缓冲液，pH值7.5，含0.2?M氯化钠），浓缩，最后加载到使用Superdex200预备级凝胶过滤柱（10毫米*100厘米）使用前在50毫米PBS缓冲液（pH值平衡7.5）含0.2?M氯化钠。 聚丙烯酰胺凝胶电泳 本地GSG分子量估计使用4鈥聚丙烯酰胺梯度凝胶在40V、10小时运行在4℃和用人页三鈥揌氯（25毫米，pH