猪TOB1基因的克隆、鉴定和在骨骼肌中的差异表达分析.pdfVIP

第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 猪TOBl基因的克隆、鉴定及在骨骼肌中的差异表达分析 蓝静1一，赵久刚1，雷明刚2，王金勇1，熊远著2 1‘重庆市畜牧科学院重庆市养猪研究所，重庆市荣昌县402460；2‘农业部猪遗传育种重点开放实验室＆农业动物遗传育 种与繁殖教育部重点实验室，华中农业大学，武汉430070 关键词：猪；骨骼肌；TOBl；差异表达 引言 必须的。这些研究都表明，TOBl基因作为一种生长抑制因子，对机体的生长发育有着重要的作用。而我们在 前期的研究中发现，TOBl基因在120日龄大白和梅大背最长肌肌肉组织中差异表达，并在大白中表达量较高 (徐德全，2005)，因此，我们对其进行了进一步的分析。 材料与方法 提取四月龄大白猪、梅山猪背最长肌组织mRNA，构建SMART eDNA文库，并结合电子克隆和RACE 技术，设计特异引物克隆得到TOB基因全长。采用ORF finder分析其开放阅读框，并推测其编码氨基酸序 列。采用EXPASY网站预测该基因的分子量，等电点及机体内半衰期等。进一步设计特异引物，以HPRT基 因作为内参，以四月龄大白猪不同组织作为研究对象，提取RNA，反转录，RT-PCR分析该基因的组织表达 谱。分离大白猪和梅山猪胚胎65天，出生后3天，5周龄，2月龄，4月龄，6月龄背最长肌RNA，反转录， RT-PCR检测基因的时序表达谱，同时分析了TOBl基因在大白和梅山猪中的表达差异。 结果与讨论 实验获得TOB基因cDNA全长2260 该蛋白分子量为38kD，理论的等电点pI为6．45。哺乳动物体内的半衰期为30小时，是一个不稳定的蛋白。 分析还发现，该基因具有从外到内的跨膜结构域。基因时空表达谱分析显示该基因在大白猪和梅山猪中的组 织表达谱相似，其在心、肝、子宫、肾、骨骼肌中表达量均较高，在脾中表达量略低，在脂肪中表达量最低。 比较TOBl基因在大白猪，梅山猪各发育阶段的RNA表达水平发现，其在梅山各阶段的表达量都明显高于大 白，且变化趋势相似。即从胚胎65天到6月龄该基因表达量逐渐升高，但在该基因二月龄时表达量有骤然下 降的趋势。 致谢 感谢徐德全老师和冯晓婷师妹在实验中的帮助。 一334—