家鸡孕酮膜Ⅰ型受体基因克隆和其差别剪接变体鉴定.pdfVIP

第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 家鸡孕酮膜I型受体基因克隆及其差别剪接变体鉴定 孙继超1，李娟1，张细权2，王亚军1+ 1。四川大学生命科学学院，成都610064；2·华南农业大学动物科学学院，广州510642 关键词：家鸡；孕酮膜受体；功能研究；表达调控 引言 孕酮是一类可快速过膜的类固醇激素，其核受体可作为转录因子调控基因表达。近年来，在斑马鱼、人 类、非洲爪蟾等多个物种中鉴定到一类孕酮膜受体(Membmneprogesteroner卿tor,mPR)，介导快速细胞反 应。 随着研究深入，发现这是一类七次跨膜G蛋白偶联受体，具三种类型并分获命名为孕酮膜I型受体 反应。在细胞水平上研究发现，这类受体与抑制性G蛋白(Gi)偶联，当G蛋白被激活后，细胞内cAMP水 平下降，同时，也可导致胞内MAPK磷酸化，调控下游基因表达。家鸡在物种进化中处于重要的位置，同时 也是重要的经济动物。目前对于家鸡孕酮膜受体结构及其在家鸡组织中的生物学效应研究尚属空白，本研究 拟克隆家鸡孕酮膜I型受体(mPPd)基因全长，鉴定其差别剪切变体并探讨其潜在生物学功能。 材料方法 取成年种鸡卵巢、精巢、脑组织，液氮冷冻后提取RNA，反转录成cDNA，利用该模板扩增家鸡mPRI 基因。EST序列分析显示家鸡mPRI基因在5’端启动子区域可能存在差别剪接。根据不同剪接变体设计引物， 扩增mPRI基因5’端非编码区的不同剪接变体。同时对mPRI编码区序列进行扩增，连接入真核表达载体 pcDNA3．1中，用于表达mPRI蛋白进行功能鉴定。 结果 膜孕酮受体可介导细胞对孕酮刺激的快速反应，对下游基因表达调控有重要作用。本实验成功克隆家鸡 mPRI基因全长，并送入NCBI数据库(Accession bp，编码346 Number．GQ203624)。mPRI基因全长1041 个氨基酸，序列比对分析发现该基因与其他物种mPR基因有高达60％的同源性，其中7次跨膜区域最保守。 进一步功能鉴定做准备。 讨论与结论 近年来，孕酮激素许多快速非基因组的反应已经被证实，包括诱导卵母细胞成熟，调节大脑生殖信号， 快速激活乳腺癌细胞信号，诱导项体反应和哺乳动物精子快速运动，证明该激素存在膜受体。本研究成功克 隆家鸡孕酮膜I型受体基因全长，并成功构建mPRI的表达载体，为下一步功能鉴定做准备。同时利用RT-PCR 方法，我们亦检测到家鸡mPRI基因在其5’端非编码区有三种不同剪接变体，这三种剪接变体在细胞内的表 达水平及潜在生物学功能还需进行验证。 致谢 · 乖通讯作者：cdwyj@yahoo．com 一468—