杜洛克和梅山猪全血免疫应答过程中细胞因子表达规律的比较研究.pdfVIP

第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 杜洛克与梅山猪全血免疫应答过程中细胞因子表达规律的比较研究 刘向东，陈洪波，李新云，赵书红 农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，华中农业大学，武汉430070 关键词：杜洛克猪；梅山猪；全血；免疫应答；细胞因子；LPS；Poly(I：C) 前言 细胞因子(Cytokines，CK)是一类能在细胞问传递信息、具有先天性和获得性免疫调节功能的多肽分子。 它们通过与靶细胞表面的细胞因子受体特异结合后来发挥功能，包括维持机体的生理平衡，促进靶细胞(免 1，IL2，IIA，IL6和IFN—G 疫细胞)的增殖和分化，抵抗病原微生物的侵袭等。本研究有代表性的选取了IL 作为研究对象，系统的研究了在细菌性刺激物LPS和病毒模拟物poly(I：C)不同的诱导时间下体外培养的杜洛 克和梅山猪全血中这些细胞因子的表达差异，这有助于在分子水平揭示品种间免疫调节机理的差异，为抗病 育种提供新的理论依据和参考指标。 材料方法 1．1新鲜血液采集 实验动物：12周龄健康梅山、杜洛克各3头；采集：采用肝素钠真空采血管采血(24mL／头)。 2．2血液培养与诱导 将采集的血液按照血液：培养基=1：3的体积培养； 培养基成分：RPMll640，2mML．谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠，10U／mL青霉素，链霉素 浓度为50 h内完成。 og／ml。诱导在37℃，含有5％C02。以上所有步骤在2 2．3血液培养物收集 在3h，6h，12h和24 mL，份一80 h时分别收集培养物，每一时间点取出相应的样本提取RNA，上清以l ℃冻存(视同血浆，以备ELASA用)。其中对照(0h样)在采集后立即提取RNA。 2．4RNA提取与检测：使用天根血液RNA提取试剂盒提取体外培养全血RNA 2．5细胞因子定量检测 设计IL LPS或Poly(I：C)处理下不同时间的点杜洛克和梅山猪全血培养物中上述细胞因子的定量检测并进行统计分析 与制图。 结果 I：C免疫应答过程，两猪种细胞因子ILl和IL6均呈现上调表达，趋势相同，但上调幅度品 LPS和poly I：C免疫应答过程，两猪种细胞因子INF．G和II_．4均呈现下调表达，趋势相同， 种间差异显著。LPS和poly I：C免疫应答过程，两猪种细胞因子IL2表达变化规律截然相反。总 但下调幅度品种间差异显著。LPS和poly I：C等免疫刺激物比梅山猪敏感。 体的趋势显示猪杜洛克对LPS和poly 讨论 I：C等免疫刺激物的应答比梅山猪更敏感。尽管每个细胞因子的作用不是单一的， 杜洛克对LPS和poly 得性免疫调节。由此可知，两猪种在先天性免疫反应过程中的调控机制相似，但相关关键基因的表达量存在 较大的差异，这可能是两猪种先天性免疫力差异的一个主要原因。两猪种在获得性免疫反应过程中的调控机 制既有相同的地方，也有不同的地方，同时也存在相关关键基因表达量差异，这两个方面构成了两猪种获得 性免疫力差异的主要原因。 致谢 0631005)及“863”项目 本研究受国家自然科学基金一广东省自然科学基金联合基金重点项目(U 在实验上给予的支持。 一306—