玉米线立体类质粒的克隆和鉴定.pdfVIP

遗传 IllER-EDlrAS(Beijing)12-(1）：15一1819911 玉米线粒体类质粒S-1的克隆和鉴定 孙允明 刘芝华 谢友菊 戴景瑞 米景九 （北京农业大学农学系） S型细胞质雄性不育玉米的线粒体类质粒 S-1为一个长 6.4kb的双链线状 DNA分子。 本文 对基本上全长的S-4（只用限制性内切酶 Pst1在两端各切掉 128b,p）在 PUC18和 pBR322两种质粒 中进行了克隆，得到4种杂合的质粒。限制性酶切图谱证明它们分别是 S-1以不同方向克隆在两种质 粒中的结果，Southern印迹杂交也证明S-1克隆在 pBR322中n 关键词：类质粒 DNA，克隆，线粒体基因组 1977年 Pring等在S型细胞质雄性不育 类质粒 S-1与玉米核 DNA 也有同源 (Cms）的玉米线粒体基因组中发现 了两种双 性[710 链、线状的附加体 DNA分子15〔1，即类质粒S-1 在植物遗传工程的研究中，特别是单子叶 和 S-2，引起了人们广泛的兴趣，随即出现了 植物，基因导人的载体还相当贫乏，根据S-1的 大量关于 S-1与 S-2的研究报道。 上述特性，它很有可能被改造成为玉米甚至其 首先搞清楚的是 S-1与 S-2 的物理图 他单子叶植物遗传工程的载体。我们正是出于 谱，，‘，它们的核昔酸链长度分别为6.4kb和5.4 这一目的，才开展了对类质粒 S-1的研究。 kb。 继之又发现在S-1与S-2的两端 （5末 由于S-1类质粒的5末‘端共价连接有蛋白 端）都存在有共价结合的蛋白质t610S-2与S-1 质，即便用蛋白酶K处理，并用酚、氯仿反复抽 的核昔酸序列分析工作也分别于 1983年和 提，也不能完全将 ，’端游离出来，很可能还存 1985年相继完成12〔,141。有趣的是，S-1与 S-2 在有共价结合的氨基酸残基[61。因而对 S-1完 的两端都具有完全相同的208bp的反向重复序 整序列的克隆变得很困难。尽管国外有人报道 歹U。 曾克隆了S-1与 S-2的完整序列110［1，但大多 在大多数S型Cms玉米的线粒体中，S-1 数报道都是克隆了 S-1与 S-2较小的不完整 与 S-2的摩尔量相等，但比线粒体主染色体数 片段1,〔2,81。国内只有王斌曾报道克隆了S-1与 高出约5倍，这说明S-1与 S-2类质粒是独立 S-2的不完整片段，并对其进行研究，此外还未 复制的。由S型雄性不育回复为雄性可育的类 见其它报道。 型时，经常 不（是绝对）伴随S-1与S-2类质粒 我们通过对 S-1序列的计算机分析，找出 的消失和线粒体主基因组的重排，这时线粒体 SunYunmingetal.:CloningandIdentification 主基因组上新出现的酶切片段与S-1和S-2有 ofPlasmid-likeS-1DNA from Mitochondria in Maize 很高的同源性[3［,111。一般认为，这时S-1与S-2 注：实验过程中得到北京大学陈章良副教授和中科院 整合进人了线粒体的主基因组上。S-1与 S-2 微生物所彭学贤副研究员的热情指导和大力帮助，在此 表示衷心感谢。 的这一特性类似于转座子的行为。 本文于1988年12月2日1坟到。 了丢失很少的基本完整的 S-1大片段，然后将 算出各片段的大小阴，然后与根据物理图谱计 该片段进行克隆，并对其进行了鉴定。 算的理论值 见（图钓进行比较，以确定克隆成