抗流感病毒神经氨酸酶通用抗体的制备和鉴定.pdfVIP

抗流感病毒神经氨酸酶通用抗体的制备及鉴定* 1 2 1 1 1 1 2，3 1 李长贵 ，Caroline Gravel ，徐康维 ，王剑锋 ，邵明 ，刘书珍 ，黎旭光 ，王军志 ** （1. 中国药品生物制品检定所，北京100050 2. 加拿大卫生部生物制品研究中心 3. 加拿大渥太华大学生化系） [摘要] 目的流感神经氨酸酶激发的免疫反应对流感有保护作用。然而，流感疫苗中神经氨酸酶 的含量并未规定。因此，建立简单的神经氨酸酶含量测定的方法是必要的。由于流感病毒的高突变 率，根据毒株的变化制备相应的抗体显然费时费力。本研究试图建立针对甲型流感病毒神经氨酸酶 的通用抗体，一劳永逸的解决抗体问题。 方法 通过生物信息学方法对流感病毒数据库中神经氨酸 酶基因进行序列分析，寻找保守序列并合成多肽。将多肽与载体蛋白匙孔蓝蛋白（KLH ）偶联，多 次皮下免疫家兔后取脾制备单克隆抗体。结果 序列分析发现神经氨酸酶N 端12 个氨基酸与头部9 个氨基酸高度保守，偶联多肽经四次免疫后效价达1：80,000，成功制备杂交瘤细胞与单克隆通用抗 体。以免疫印迹方法证明两通用抗体均能与流感病毒N1~N9 亚型神经氨酸酶特异性反应。 结论 通 过寻找保守蛋白序列并偶联到载体上，免疫家兔获得了针对甲型流感病毒神经氨酸酶的通用抗体。 [关键词] 甲型流感病毒；神经氨酸酶；通用抗体；免疫印迹 Establishment and identification of universal antibodies against all subtypes of the influenza A viral Neuraminidase 1 2 1 1 1 1 2，3 Xu Kangwei , Caroline Gravel , Li Changgui , Wang Jianfeng , Shao Ming , Liu Shuzhen , Sean Li , 1 Wang Junzhi (1 National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, the State Food and Drug Administration, Beijing, PR China , 2 Centre for Vaccine Evaluation, Biologics and Genetic Therapies Directorate, HPFB, Health Canada, Ottawa, ON, Canada 3 Department of Biochemistry, Microbiology and Immunology, University of Ottawa, Ottawa, ON, Canada) [Abstract] Objective Neuraminidase-induced immune responses are correlated with protection of humans and animals from influenza. However, the amounts of neuraminidase in influenza vaccines are yet to be standardized. Thus, a simple method capable of quantifying neuraminidase would be desirable. The current seasonal influenza vaccines are produced using the strains recommended by the World Health Organization (WHO) and change every year. So it will