超薄切片表面高低起伏反差机制初步探索.pdfVIP

Soe． Electr．Mierose 电子显微学报J．Chin 2004年 508 23(4)：508—508 超薄切片表面高低起伏反差机制的初步探索 钧“3 李鑫辉1，季彤2，张晓东1，张陈平2，胡 (1上海交通大学Bio．X生命科学研究中。纳米生物学实验室，上海200030 2上海第二医科大学附属第九人民医院，上海200011； 3中国科学院上海应用物理研究所，上海201800) 自AFM发明以来，用它来进行各种超薄切片表 现并无明显差异。具体结果如下：当切片厚度小于 面形态学研究的报道屡见不鲜，包括形态学的比较 50nm时，上下两个表面均表现为细胞低于环氧树 研究、关键结构的识别、精细结构的定量化研究等 脂，核仁等处最低。当切片厚度在50～100nm之间 等。但是长期以来一个关键性的问题就是：为什么 时，切片正面表现为细胞远高于环氧树脂，这种“凸 用超薄切片法得到的各种厚度不同的超薄切片表面 起”的平均高度可超过50nm，且细胞轮廓清晰，核 会存在纳米级的高低起伏?且这种起伏能够反映组 仁、核膜等部分的凸起最明显。但反面凹陷的形貌 织或细胞的精细结构?这个问题一直没有得到回 随厚度变化不大。切片厚度继续加大，正面凸起逐 答，有关超薄切片表面反差机制的研究也未见报道。 渐减小，并转为凹陷，并随厚度加大凹陷程度也开始 本文试图就回答上述问题做一些初步的探索。实验 加深。反面的凹陷也随切片厚度增加而变大。对不 同厚度切片正反两个面的研究可知，利用AFM研究 以培养的Tea8113、ECV．304、C6、人口腔粘膜上皮细 胞等几种细胞为研究对象，固定、包埋、切片后，不同 超薄切片表面的超微结构以选择厚度在50～100nm 厚度的超薄切片漂浮在水面上，朝上的那一面作为 的切片为宜，并且注意切片面的选择。至于超薄切 正面，另一面为反面，转移到新解离的云母片上，干 片上下表面细胞随厚度不同表现的凹凸起伏变化的 燥后用AFM在空气中观察。结果显示，切片表面的 原因，可能与切片过程中刀与环氧树脂包埋块的相 高低起伏与切片厚度密切相关，并且上下表面的起 互作用有关，有待进一步研究。 伏差异很大，有时甚至截然相反；不同厚度正反面的 参考文献略． AFM表面成像如图l，图2所示，不同种类的细胞表 图1厚度为40am的超薄切片反面的AFM图像，箭头所指为核仁，是整个 切片的最低处。图2厚度为60hm的超薄切片正面的AFM图像．可见细 胞轮廓清晰，核膜完整，箭头所指为核仁。两图扫描范围：30Mmx30pro。