脑外伤后短时死亡脑干病理变化的实验和应用研究.pdfVIP

脑外伤后短时死亡脑干病理变化的 实验及应用研究 周 伟 (最高人民检察院检察技术科学研究所) 摘要本研究建立了脑干机械性损伤(肉眼无明显改变)致迅速死亡的动物模型，应用免疫组化、分子生物学、电 镜及图像分析等方法，研究脑干损伤的物质基础——神经元、轴索、胶质细胞、血脑屏障。研究结果表明：脑外伤后 短时内死亡是脑干损伤的结果，白蛋白、纤维联结蛋白、神经微丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白、原癌基因c—Fos等可作 为诊断脑干损伤早期病变的灵敏度高、特异性强的指标。在实验研究的基础上，将上述指标应用于怀疑脑干损伤 致死案例，验证了这些指标的实用价值，以期为脑外伤后短时间内死亡案例的死因判定提供客观证据，为颅脑损伤 的临床救治工作指明重点。 关键词脑干损伤病理学 颅脑损伤是机械性损伤最主要的致死原因之一。目前对损伤程度重、范围广泛的颅脑损伤致死案例的 死因鉴定并不困难。但在法医实际工作中，常遇到头面部遭受暴力后迅速死亡、临床将死因归咎于脑干损 伤、尸检却找不到或仅有轻微的形态改变的案例，其死因鉴定由于缺乏有说服力的客观证据而成为法医工作 中的一大难题。从理论上分析，颅脑损伤致死应是损伤脑干生命中枢的结果。因此，查明颅脑损伤短时内死 亡与脑干损伤的关系，探索和确立脑干早期损伤的法医学鉴定依据，对这类案例的死因判定具有极其重要的 意义。 1材料与方法 组)、阳性对照组(即广泛性严重颅脑损伤组)、阴性对照组(即非颅脑损伤组)。 1．1检材分组依据 1．1．1机械性脑干损伤致死组 ①明确的头面部外伤史，均有目击证人和(或)头面部遭受暴力的证据；②头面部遭受暴力后立即昏迷， 死亡迅速，多发生于伤后3h内；③经系统尸检、病理组织学检查及毒物分析排除了疾病、中毒及颅脑以外脏 器损伤致死的可能性；④颅脑检查：肉眼观察，元颅骨骨折、颅内无占位性血肿和脑疝、无明显脑挫伤；HE染 色镜检，可有轻度脑干水肿和实质内小灶性出血等轻微病变。 1．1．2广泛性严重颅脑损伤致死组 ①明确的头面部外伤史；②临床表现符合重度颅脑损伤的特点；③颅脑损伤广泛和／或严重、大体尸检及 常规组织学检查均可见明显脑损伤性改变，排除自发性疾病。 1 1．3非颅脑损伤死亡组 ①无头面部外伤史；②无任何颅脑损伤的改变；③死因明确，系颅脑以外损伤或疾病。 1．2免疫组化染色所选抗体 1．2．1用于观察神经元病变 反映轴索的变化。 1．2．2用于观察神经胶质细胞病变 400 应性增生。 ． 1．2．3用于反映血脑屏障通透性 ①抗白蛋白(n1)抗体；②抗纤维联结蛋白(Fn)抗体。 1．3实验方法 (1)免疫组化染色采用标记链霉菌素一生物素(LSAB)法引和双重免疫酶标染色法【4J。 系统。 J。 (3)延脑网状结构透射电镜标本的制作与观察【5 测，测定阳性反应物的面积及灰度。将所测数据输入dBASEⅢ数据库，应用SAS(statistics analysissystem)统计 软件进行统计处理。 2实验结果 2．1血浆蛋白的免疫组化染色 正常对照大鼠：A1、Fn阳性染色见于脑膜、血管壁及毛细血管，神经元及神经胶质细胞均呈阴性；大鼠机 质细胞；广泛性脑损伤大鼠与机械性脑干损伤大鼠的染色结果基本相同。其他各组均未见Al或Fn阳性神 经元、胶质细胞及神经纤维。人体实验结果类似于动物实验。 2．2神经元与星形胶质细胞特异性骨架蛋白的免疫组化染色 质细胞多围绕在血管周围。死后脑损伤组：NF染色可见轴索排列紊乱、扭曲、粗细不均等改变。GFAP染色 示是生前损伤。两者结合可诊断伤后存活lh的大鼠脑干损伤。严重颅脑损伤及怀疑脑干损伤人体尸检材 料，其神经轴索的变化，GFAP免疫活性及星形胶质细胞的增加较大鼠慢，伤后存活3h者才较明显。自溶等 死后因素对NF及GFAP免疫活性无明显影响。 2．3神经元与神经胶质细胞内特异性蛋白的免疫组化染色 部分胶质细胞有S-100缺失，表现为胞浆及胞核阳性染色强度减弱。人体尸检材料中，1例怀疑脑干损伤，2 价值。 2．4 C．10s．mRNA原位杂交结果