人胰腺癌中miRNAs的差异表达和部分功能研究.pdfVIP

中华医学会病理学分会2010年学术年会论文汇编 大会发言 A-01 人胰腺癌中miRNAs的差异表达及部分功能研究 陈杰，于双妮，马怡辉，赵武干，卢朝辉 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科100730 的配对，促进mRNA的降解或抑制mRNA的翻译从而抑制其靶基因的表达。胰腺癌是临床上 治疗困难的疾病，对人类的健康威胁极大，大量研究工作集中于胰腺癌的肿瘤编码基因的 筛查和功能的鉴定，关于miRNAs与此疾病的关系知之甚少，研究miRNAs在胰腺癌发病机 制中的作用具有重要的意义。 本实验以用miRNAs芯片筛查胰腺癌组织与正常胰腺组织中差异表达的miRNAs。其中 上调的有18个，下调的有14个。NorthernBlotting实验验证了部分的芯片结果。K—RAS 改变是胰腺癌中最典型的特征，并且是导致胰腺癌肿瘤恶性行为的一个关键因素，我们检 测了胰腺癌细胞系中K—RAS蛋白水平，有些miRNAs的靶基因可能为K-ras．通过生物信息 学验证，我们选定了几个miRNA进行了功能研究，得到一些有意义的结果。 miR-96的研究：我们首先检测了胰腺癌细胞系以及正常胰腺组织中miR-96的表达水 PaCa-2 平，发现其在正常胰腺组织比胰腺癌细胞系中的表达下降。用质粒为载体在Mia 细胞中高表达miR-96，结果发现K—RAS的mRNA水平不变、而蛋白水平下降，肿瘤细胞的 恶性生物学行为(增殖、克隆形成能力、迁移和侵袭能力)受到了明显的抑制，同时肿瘤 细胞凋亡增强；我们又检测了RAS下游通路中的两个重要分子ERK和AKT的表达有显著下 miR-96的前体序列发现，各物种间存在多个位点核苷酸的多态性，且位于前体的茎环结构 区，但是成熟体的序列十分保守(99％序列相同)，小鼠的miR-96成熟体序列与人的序 列完全一致，因此推测miR-96可能是进化过程中保留下来的具有肿瘤抑制功能的重要分 子。过表达miR-96能在细胞水平上抑制肿瘤的恶性生物学行为，miR-96的表达下降是胰 腺癌的肿瘤恶性行为发展的一个因素，是阐明胰腺癌肿瘤分子机制的一个重要补充。 著下调，分析其可能在胰腺癌发生发展过程中发挥作用，但结果不清。本研究以人胰腺导 管腺癌组织及细胞系为研究材料，检测hsa-mir-217的表达并探讨其功能及靶基因，旨在 为胰腺导管腺癌的治疗寻找新的靶点。采用锁定核酸原位杂交及realtimeRT—PCR的方法 抑制胰腺导管腺癌细胞PANC—l及MIAPaCa-2的增殖及非锚着依赖性生长，体内可抑制 PANC—l移植瘤的生长，hsa-mir-217体内外均发挥抑痛基因的作用；用生物信息学软件对 KRAS蛋白表达呈负相关：同时在PANC一1及MIAPaCa-2中恢复hsa—mir一217的表达可抑制 KRAS蛋白表达及下游p-AKT活性，而在MIAPaCa一2中降低hsa—mir一217的水平则升高KRAS 蛋白的表达及细胞的非锚着依赖性生长能力：报告基因实验进一步证实KRAS是 hsa-mir-217的直接靶基因。这些结果提供了一种潜在的以miRNA为基础的胰腺癌治疗方 法。 miR-27a的研究：我们前期的miRNA芯片发现胰腺癌中miR一27a存在上调，近年来的 大会发言 中华医学会病理学分会2010年学术年会论文汇编 研究发现，miR一27a在多种类型恶性肿瘤中表达上调，被认为具有癌基因功能。但是其在 胰腺癌中的功能尚不清楚。本研究旨在探讨认识miR一27a在胰腺癌细胞中的作用及可能机 制。 inhibitor，抑制胰腺癌细胞中内 我们应用能够特异性抑制miR-27a活性的microRNA 源性miR-27a功能，观察抑制后胰腺癌细胞生物学行为的改变；应用microRNAs靶基因预 测软件和双荧光素酶报告基因实验筛选鉴定miR一27a的功能靶基因：应用免疫组织化学和 western blotting的方法初步探讨miR-27a调控胰腺癌细胞恶性生物学特性的可能机制。 结果表明：抑制miR-27a能够降低胰腺癌细胞PANC一1和MIAPaCa一2的生长、克隆形 成以及运