基于穿梭质粒血清7型胸胸肺炎放线杆菌双价弱毒疫苗初步研究.pdfVIP

国家星火培训计划及国家农业行业科技：第十届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会论文集 127 基于穿梭质粒的血清7型胸膜肺炎放线杆菌双价水 弱毒疫苗的初步研究 刘金林¨，陈砚，陈焕春，贝为成¨· (华中农业大学动物医学院预防兽医学实验室，武汉，430070) 产生针对ApxIA的抗体。二免后两周以高致病性的血清l型胸膜肺炎放线杆菌攻毒，经气管免疫仔猪的保护 率略高于肌肉免疫组，本研究结果为将胸膜肺炎放线杆菌开发为多价疫苗载体奠定了基础。 关键词胸膜肺炎放线杆菌；弱毒疫苗；载体 目前所使用的胸膜肺炎放线杆菌■ctinobacillus 亚单位疫苗。由于APP血清型多，各血清型分泌的毒素差异很大，导致各血清型之间交叉保护率较低，大 大增加了防治该病的难度。近年来，减毒活疫苗的研究，为该病的防治带来希望。可以预见，应用新型安 全、高效的基因缺失疫苗将成为控制猪传染性胸膜肺炎的一种趋势。由于血清7型胸膜肺炎放线杆菌不分 APP两个关键的免疫保护性蛋白，因此，拟通过本研究找到提高胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗免疫原性的途 径，同时可以通过该系统表达其它呼吸系统病原菌的重要免疫原，为呼吸系统疾病的预防与控制提供新方 法。 1．材料和方法 1．1实验动物 6．8周龄仔猪购自湖北省某大型猪场，APP血清学和病原学检测均为阴性。 1．2穿梭质粒的构建 将PCR获得的apxlA基因经酶切鉴定正确后连接到经酶切的穿梭质粒pJFFNX．的因基源外带携到得，中 穿梭质粒pJFF-IA。 1．3突变株的筛选与生物学特性分析 HB04C2(apxlIC／apxllA+／apxlA+)。 代都用P3和P4PCR鉴定遗传稳定性。 blot 128 国家星火培训计划及国家农业行业科技：第十届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会论文集 检测。 10次，测定每小时的活菌数，比较两株菌增长能力。 1．4 HB04C2对仔猪的免疫保护性研究 剖检病变。 2．结果与分析 2．1穿梭质粒pJFF-IA的电转化及HB04C2的筛选 N端特异性引物P3 采用高效电穿孔方法将穿梭质粒pJFF．IA转化到基因工程突变HB04C一。以apxlA 和P4进行扩增，可得到826bp特异片段，而亲本菌为阴性。结果鉴定获得四个阳性转化子。 2．2HB04C2的生物学特性 分析结果显示连续传代后，都能扩增出apxlA 本菌株14804C．中能够稳定传代。 KDa处出现一条特异性带，与预期的的分子量相当。而亲本菌株 blot检测，结果显示重组菌HB04C2在110 具有生物活性的ApxtA。 的生长速度。 2．3HB04C2免疫仔猪血清学检测 肉免疫组。对照组的仔猪在整个试验过程血清抗体均呈阴性(表略)。 2．4攻毒后的保护效果 结果显示，无论是肌肉免疫途径还是鼻内免疫途径，都能提供给仔猪对异源血清l型攻击的有效的保 护，但气管免疫途径可产生更好的保护效果(表略)。 参考文献：(略)