组织工程尿道初步研究.pdfVIP

第八部分泌尿系其他疾病 分布；2月时，平滑肌细胞大量再生，组织化，血管数量开始减少，但血管内径增大， 血管壁更加平衡分布生长。血管形成在基质支架边缘和中心区域表现明显；3月时，平 滑肌立体重建，再生的平滑肌类1以与正常的平滑肌，出现正常的供应血管，并且支架内血管 分布较多。 病理切片及免疫组织化学检查显示3组兔子均能成功地完成膀胱组织再生修复重 建，猪DAM支架组和猪BAM支架组在膀胱容量及修复时间上并无显著性差异。但是，与 猪BAll支架相比，猪DAM支架更具有英特有的优点：来源广泛，费用低廉，制备方法简 单，脱细胞效果确实，低免疫原性，材料面积大，可制成多种形状，是很有应用前景 的组织工程的支架材料。 【关键词】组织工程：细胞支架；细胞外基质；膀胱脱细胞基质支架；真皮脱细胞基 质支架；异体移植；膀胱修补；膀胱扩大成形术；再生修复；重建：功能替代 37．组织工程尿道的初步研究 李国松刘欣万荣欣顾汉卿 天津市泌尿外科研究所，天津，300211 组织工程是一门新兴学科，它是利用生物学和工程学原理研究、开发用于修复、 维持和改善损伤组织功能的组织替代物的一门学科。自从80年代正式确立以来，已经 取得了突破性的进展，目前处于研发阶段的组织工程产品很多。组织工程产品不但解 决了供者器官来源不足的问题，而且大幅减轻了发生异体移植物排斥反应的危险。 本试验研究目的是研究尿道上皮与平滑肌及骨髓问充质干细胞体外培养的方法， l adderacel l ul armatrix 探讨以膀胱脱细胞基质(b graft，B删G)为支架进行以上细胞 体外培养的方法和可行性，为利用组织工程技术进行尿道重建提供实验基础。 实验主要包括以下五个部分： 第一部分探讨了兔尿路移行上皮(UEC)细胞的体外培养，手术获取免尿道粘膜标 本，以组织块法，添加有50u 343 中国中西医结合泌尿外科第八次学术年会 2．-一1 7天可见上皮细胞生长，至1 4天可传代。经免疫细胞化学与透射电镜检查证实为兔 UEC细胞。细胞生长曲线与细胞贴壁率曲线均显示细胞的岳鹚哇长活性。细胞冻存三个月 后复苏细胞形态与生命力维持正常。本部分实验推知嗍EM／F12能促进uEc体外增殖，可获 得大量UEC种子细胞。 第二部分讨论了兔尿路平滑肌细胞(USMC)的体外原代培养。在无菌条件下获取兔 尿道平滑肌标本。用复合酶消化法，消化液含有0．2％l型胶原酶、2．5mg／mI Di 一定细胞并接种培养。大约7天可传代。细胞经冻存与复苏后生长活力无显著差异。经 a-actln免疫组织化学鉴定所得细胞为平滑肌细胞(sMc)。本实验培养的兔USMC生长力 旺盛，可传代6～7次，所得细胞经签定为SMC，可为尿路组织工程与其他细胞生物学实 验提供丰富的细胞来源。 第三部分尝试构建尿道细胞一脱细胞基质支架支架复合体。我们以从兔膀胱中提取 制成脱细胞基质作为细胞支架，将实验获得的细胞单独接种于BAMG的一侧、两种细胞 分别接种于同一支架的两侧，每7天取出标本进行HE染色，观察细胞在基质上的生长情 况。染色结果发现此种方法可制备出细胞一支架复合体。本研究—方面证实了我们培养 出的尿路细胞进行组织工程后续实验的能力，另一方面也证实该BAMG可作为细胞生长的 底物，能促进细胞黏附与生长。 第四部分获取幼兔骨髓组织，采用梯度离心法在体外用QDMEM培进行MSCs分离培 养。结果原代骨髓问充质千细胞在经过传代换液后，基本得到纯化，约10-一12天时间 扩增形成单层。可传代培养8代。细胞冻存后复苏细胞形态与生命力维持正常。流式细 胞仪检测结果表明细胞表面抗原CD44+，CD45-，与国际相关报道一致。本试验证实了 兔骨髓问充质细胞生长力旺盛，可传代多次，可用作尿道组织工程的种子细胞。 第五部分尝试构建骨髓问充质干细胞一脱细胞基质支架支架复合体。将培养出的骨 髓问充质干细胞作为种子细胞，接种于脱细胞基质一侧。于3-6天取出后以扫描电镜检 测细胞生长情况。结果发现细胞生长旺盛，形态良好。证实了脱细胞基质支架作为尿 道组织工