叶酸对砷所致肝细胞毒性与氧化应激状态的影响.pdfVIP

片60 min；苏木精一伊红染色，光镜下进行组织形态 组比较，差异有统计学意义(P0．05)。 学观察。 3讨论 1．2．3免疫组织化学观察：将未经苏木精一伊红染 近年来的研究表明，除了活性氧，活性氮族也 色的切片常规二甲苯脱蜡后进行S—P免疫组化染 可造成核酸损伤。适量的NO对于维持机体的正常 色，在肝组织切片上滴l：300稀释的鼠抗人8一生理功能是必不可少的．但过量的活性氮族可能参 NO：一G单克隆抗体，在4oC条件下孵育过夜，按照 与了砷的致癌过程。虽然Gurr等对砷暴露对不同种 试剂盒的操作步骤进行，DAB显色，苏木精复染细 类细胞的NO生成情况的影响进行了详尽的综述， 胞核，自来水冲洗返蓝。常规脱水、透明。中性树胶 Pineda等也发现砷暴露可造成儿童体内NO生成增 封固。阅片时，先观察整张切片。再随机选择不同区 多，但是关于砷暴露与活性氮族损伤效应之间的关 域的5个高倍视野，显微镜下拍照．并应用图像分 系报道很少。 析软件对8一NOrG表达的吸光度值进行定量分析。 内源性的活性氮族主要来源于细胞质内一氧 1-2．4 NO水平检测：用硝酸还原酶(试剂盒)法检化氮合酶介导的L_精氨酸代谢途径，包括NO、NO： 测肝匀浆中NO水平。 及过氧亚硝基阴离子(ON00一)等。活性氧和NO之 1．3统计学分析：采用SPsS11．0统计软件进行数 间涉及许多信号传导通路。它们之间也存在着协同 据处理，计量资料用面±s表示，用单因素方差分析 作用，NO和·Of可发生快速非酶促化学反应，生成 (ANOVA)比较各组间的统计学差异．以P0．05表 示差异有统计学意义。 点迅速反应生成8-N02一G，因为核酸的化学性修饰 2结果 在DNA复制过程中可引起突变，因此8-NO：一G被 2．1小鼠肝组织形态学观察结果：对照组肝细胞核 认为是DNA和RNA损伤的标志物。有报道8一 膜完整，核仁清晰。胞浆正常。而染砷组肝脏细胞肿 胀，胞浆出现空泡状改变，细胞核固缩、碎裂或溶 判断是否有癌变倾向的标志物。 解，肝组织有明显的病理改变。 本实验发现．慢性砷暴露小鼠肝脏中8-NO：一G 2．2肝组织细胞核酸损伤的免疫组织化学观察结 的表达增多，同时伴有NO水平增高，提示砷可能通 过活性氮族引起肝组织的核酸损伤，而8一NOrG的 果：小鼠肝组织抗8-Nitroguanine的免疫组化结果 显示，染砷组小鼠肝组织细胞中靠近细胞膜的胞浆 表达主要集中于细胞浆内，细胞核内染色较少，说 明活性氮族对RNA的损伤比较明显，8-NO：一G的 被染成棕褐色．呈现明显的抗8-Nitroguanine阳性 反应．而对照组小鼠肝组织细胞中几乎无8一 高表达反映了活性氮族诱导的RNA损伤与砷的肝 毒性作用有关。因此，砷可能通过活性氧引起DNA Nitroguanine的表达。各组小鼠肝细胞的抗8一 的氧化损伤，而通过活性氮族主要引起RNA的损 Nitroguanine免疫染色平均吸光度值明显大于对照 组，差异有统计学意义(P0．05)，并随着砷暴露剂伤。本实验应用活性氮族损伤核酸的标志物探讨砷 量的增加而呈现明显的剂量一反应关系。 的毒作用机制，为砷的肝毒性机制研究提供了研究 2．3无机砷对肝匀浆中NO水平的影响：NO水平 前景，同时也提示，8-NO：一G可作为检测砷的肝毒 性作用的早期敏感生物标志物。 在中、高剂量组(10、20斗mo饥)明显增高，与对照 叶酸对砷所致肝细胞毒性和氧化应激状态的影响 徐苑苑王惠惠孙贵范 (中国医科