体外胃癌间质成纤维细胞模型建立与生物学特性初步研究.pdfVIP

第四届全军胃肠外科学术会议暨2009普通外科热点论坛论文汇编 体外胃癌间质成纤维细胞模型建立和生物学特性初步研究 200433上海市长海医院普外科(张浩申晓军毕建威)； 检验科(唐古生)；第二军医大学训练部(方国恩) 成纤维细胞是基质组成中主要的细胞类型，参与组织结构和功能的动态平衡过程。成纤维细胞在肿瘤 进展过程中发挥重要作用，如参与肿瘤基质的合成、沉积、重建等过程，同时还是生长因子旁分泌的来源，影 响肿瘤细胞的生长。成纤维细胞是大部分基质成分如各种胶原、蛋白酶类、蛋白酶抑制剂、生长因子、结构性 蛋白聚糖等的来源细胞。细胞成瘤潜能受到其微环境的很大影响。恶性细胞如果生长于适当的组织微环境 中则可以被诱导保持正常的分化状态。以往认为成纤维细胞的作用是一个被动过程，只是对于来自肿瘤细 胞的信号作出相应的应答。而近来有研究报道肿瘤周围的基质成纤维细胞发生遗传功能改变。肿瘤组织中 成纤维细胞胶原蛋白和透明质酸合成增多，增殖能力改变，进而分泌生长因子，刺激上皮细胞的增殖。肿瘤 组织来源的成纤维细胞运动及侵袭能力也是增强的。因此Schor等推测成纤维细胞异常影响了上皮肿瘤的 表型，成纤维细胞的缺陷可影响基质一上皮相互作用，促进肿瘤形成。成纤维细胞不仅仅是一个被动角色， 而是一个潜在的肿瘤诱导者。转化HGMF和正常HGMF之间无论在表型还是在功能上都存在生物学上的 区别，体外建立胃癌间质成纤维细胞模型，可模拟胃癌的生长环境，为深入研究成纤维细胞和胃癌的关系奠 定基础。 材料与方法 1．细胞及材料：人胃癌细胞系MKN一45细胞株由长海医院中心实验室保存。人胃粘膜成纤维细胞 mucosal (Humangastric 自德国Promega公司。 一45培养上清液培养HGMF，每3d传l代，历时2个半月至20代，即转化成纤维细胞，建立细胞模型。(2) 9、TN、bcl一2增殖细胞核抗原。(5)端粒酶活性检测试剂盒测定细胞端粒酶活性。 3．计量资料采用t检验，方差分析(进而进行两两比较的q检验)、线性相关分析，计数资料采用X2检 验。数据用SAS统计软件分析。 结 果 1．体外胃癌间质成纤维细胞模型建立：体外建立肿瘤基质成纤维细胞模型，可较好地模拟体内胃癌微环 境中成纤维细胞的功能状态。 2．体外胃癌间质成纤维细胞模型的生物学特性初步研究：(1)形态学对比：光镜下正常HGMF呈梭长 形，大小一致，可见双核细胞；细胞模型中转化HGMF能重叠生长，胞体变大，且大小不一，多见大胞体细胞、 双核及多核细胞。透射电镜观察见HGMF结构未见异常；细胞模型中转化的HGMF内可见畸形核，多个核 仁且核仁边集，核浆比例增加，线粒体、滑面内质网增多，可见到高尔基复合体，粗面内质网、较多低电子密度 106个转化HGMF蛋白浓度明显高于HGMF，分别为(O．5195 HGMF和转化HGMF的端粒酶活性分别为0．6296 阴性对照A=0．016，阳性对照A=1．27。 第四届全军胃肠外科学术会议暨2009普通外科热点论坛论文汇编 讨 论 肿瘤基质成纤维细胞模型建立的意义：肿瘤生长与发展必须依赖于支持肿瘤的基质形成，成纤维细胞是 产生基质的重要细胞与主要的基质细胞成分。它基因稳定，受肿瘤微环境影响，活化出现异常表达，调节与 控制肿瘤细胞的有丝分裂和形态变化。因此提出靶向成纤维细胞的抗肿瘤基质治疗策略。 现有研究手段主要是用肿瘤细胞与成纤维细胞合并培养方法来观察肿瘤基质成纤维细胞的表型变化情 况。进展期胃癌MKN一45细胞能以实体瘤或腹水瘤形式生长，因此我们用MKN一45细胞培养上清液诱导 人胃粘膜成纤维细胞，获得能稳定生长且具有肿瘤基质成纤维细胞某些生物学特性的转化成纤维细胞，为研 究肿瘤基质成纤维细胞的异常表型以及其相应功能提供理想的细胞模型，为将来研究其恶性转化机制、开发 靶向肿瘤基质成纤维细胞药物提供有价值的细胞模型。 人胃粘膜成纤维细胞恶性转化：我们的实验发现受肿瘤细胞培养上清液持续作用的人胃粘膜成纤维细 胞在多方面有异于其亲代细胞的恶性化特征。首先形态上出现大胞体、双核及多核、畸形核细胞，多核与畸 形核是恶性细胞的特征；增殖明显增快，这可能与其PCNA表达增强和线粒体、粗面内质网、滑面内质网增多 等功能活跃改变有关，也与受到来自细胞分泌的内皮细胞生长因子刺激生长作用有关。端粒酶活性与细胞 周期有关：永生化细胞在G1／G0期开始表