缬沙坦与AⅡ对成人冠状动脉内皮细胞NOS与NO的影响.pdfVIP

基础研究 2007海河之滨心脏病学文章汇编 缬沙坦和AⅡ对成人冠状动脉内皮细胞NOS和No的影响 ·田风石1张宏 天津市公安医隐D内科 [摘要】目的研究缬沙坦和血管紧张素Ⅱ(A11)对成人冠状动脉内皮细胞一氧化氮合酶 (NOS)活力及一氧化氮(No)含量的影响。方法将培养的第三代成人冠状动脉内皮细胞分 lI II mol／L．1mol／L，10mol／L)组，当细胞长满培养瓶表面60％时加入缬沙坦和／或AⅡ，再 培养36小时后检测No含量及NOS活力。结果与对照组相比，单独应用AⅡ能抑制NOS活 力并降低N0的含量，单独应用缬沙坦对NOS活力及No的含量均无明显影响。当缬沙坦和A Ⅱ合用时可逆转后者对NOS活力及No含量的负性作用，且呈剂量依赖性。结论AⅡ能降低 成人冠状动脉内皮细胞NOS活力并抑制其No的生成，缬沙坦能逆转AⅡ的上述作用，提示 缬沙坦可改善成人冠状动脉内皮细胞的功能，从而起到预防冠状动脉粥样硬化的作用． 关键诃。 缬沙坦；血管紧张素H；成人冠状动脉；内皮细胞；一氧化氮；一氧化氮合成酶 血管内皮功能障碍是形成动脉粥样硬化(AS)的始动因素，并能加速As的发展。血管 紧张素Ⅱ(A11)不仅是强有力的缩血管物质，而且对缺血性心血管疾病的发生发展亦有重 要影响，目前关于AⅡ过度分泌造成内皮细胞损伤的报道多取材于动物血管和脐静脉，但内 皮细胞存在异质性Ⅱ1，即不同动物、不同组织和器官、不同血管的内皮细胞，它们在结构、 功能、抗原成分、代谢特性及对生长因子的反应等方面均不相同，，甚至在同一个微循环单位 内的不同阶段的内皮细胞也表现出明显的差异。本研究以成人冠状动脉内皮细胞作为实验材 料，来观察AⅡ和AⅡ1型受体(AT．-R)拮抗剂缬沙坦对该细胞功能的影响，使得实验结果更 加贴近人体实际． 材料与方法 1．主要试剂：AⅡ和I型胶原酶购自美国Sigma公司；缬沙坦由北京诺华公司提供；DMEM 染色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；No及NOS试剂盒购自南京建成生物工程 研究所。 2．方法：(1)成人冠状动脉内皮细胞的培养和鉴定圆(2)当细胞传至第2代时，将其以2．5 ×105／lⅡ1的浓度，接种于5ml大小的培养瓶中，待细胞数达培养瓶表面60％时加入药物，再 llmol／L) 培养36小时。(3)实验分组：对照组：为无血清的DMEM培养液；AⅡ(浓度为10 组；缬沙坦(浓度为10lImol／L)组：AⅡ(10lIiimol／L)+不同浓度缬沙坦(0．1、1、10 ppmol几)组，其中后三组先加入缬沙坦预作用l小时，再加入AⅡ，共重复4次。(4) 培养细胞的前处理：将药物作用36小时后的细胞消化，离心，弃上清，加生理盐水将所沉 ll 淀细胞制备成1071的匀浆，-20℃下反复冻溶3次以破碎细胞。(5)NO含量测定：采用 硝酸还原酶法将N盯还原为N筲，通过Oress显色分光光度计，在550nm波长下测定吸光度， 生成N0，No与亲核性物质生成有色化合物，在530姗波长下测定吸光度，根据吸光度的大 小可计算出NOS活力． t 3．统计学方法：所得数据以X±s表示，组问比较采用t检验．相关分析以Pearson相关 2007海河之滨心脏病学文章汇编 基础研究 系数表示双变量资料的相关关系，PO．05有统计学意义． 结果 1．AⅡ和缬沙坦对成人冠状动脉内皮细胞N0含量的影响(表1)：AngⅡ组N0含量明显低于 对照组(P0．05)；NO含量在缬沙坦组和对照组之间的差别没有统计学意义(P=-O．891)； II+O．1Il II+1ll kng mol／L缬沙坦组No含量高于Angll组但低于对照组(P0．05)；Angmol／L