低氧训练诱导AMPK对小鼠骨骼肌PPARα表达的影响.docVIP

低氧训练诱导AMPK对小鼠骨骼肌PPARα表达的影响 　　摘要：研究常氧耐力训练、低氧刺激以及低氧耐力训练4周后，AMPKα2转基因鼠和AMPKα2基因敲除鼠骨骼肌AMPKα1/α2磷酸化、核内PPARα蛋白含量，探讨低氧训练下AMPKα对PPARα的影响。方法：C57BL/6J野生小鼠、AMPKα2基因高表达和AMPKα2基因敲除鼠各40只，按体重随机分为4组：常氧安静对照组，常氧耐力训练组，低氧安静对照组，低氧耐力训练，每组10只。耐力训练组小鼠训练设计为：每天1小时坡度为0，速度为12 m/min的跑台训练，每周6天，持续4周。低氧方案为：每天间歇性低氧8小时，模拟海拔4 500 m左右的低氧环境。测定磷酸化AMPK（Thr172）、核内PPARα蛋白含量以及PPARαmRNA含量。结果：1）四周低氧耐力训练可激活骨骼肌AMPK，促进AMPKα磷酸化；2）四周低氧耐力训练显著增加骨骼肌核内PPARα蛋白的表达；3）与WT鼠相比，低氧耐力训练显著增加OE鼠AMPKα磷酸化和核内PPARα蛋白表达，显著降低KO鼠AMPKα磷酸化和核内PPARα蛋白表达。提示核内PPARα蛋白水平与AMPK激活后的AMPKα磷酸化水平密切相关。 　　关键词：AMPKα2；PPARα；耐力训练；低氧刺激；低氧耐力训练 　　中图分类号：G804.7文献标识码：A文章编号：1006-2076（2013）05-0040-07 　　低氧运动是运动员经常采用的训练方法。近年来，它也成为大众健身减肥降脂的新途径。然而，低氧运动如何影响骨骼肌的有氧代谢，它产生作用的分子机理是什么，已成为人们十分关心并迫切需要深入研究的问题。 　　目前，学者们越发关注一组与脂质代谢密切相关的过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activated receptors， PPARs） 家族。其中， PPARα作为PPARs 中的一个亚型，能够促进高密度脂蛋白的合成，抑制极低密度脂蛋白的合成[1]；活化并调节乙酰辅酶A氧化酶（ACO）、中链酰基辅酶A脱氢酶（MCAD）等与脂肪酸代谢相关的酶的活性[2]；另外，还可以促进白脂肪向褐色脂肪进行转化[3] 等。PPARα作为脂肪酸代谢的体内平衡感受器，参与调节脂肪氧化组织的应答，成为众多学者关注的热点。 　　我们知道，腺苷酸活化的蛋白激酶 （AMP-activated protein kinase，AMPK）是骨骼肌细胞的能量感受器，可通过感受骨骼肌能量变化（AMP上升，ATP下降）的程度而被激活。而PPARα作为脂肪酸代谢的重要调节因子，在低氧耐力训练后会发生何种变化，在低氧运动的应激适应中AMPK的激活是否会影响PPARα的表达呢。本实验试图通过对野生型、AMPKα2基因高表达以及AMPKα2基因敲除小鼠，进行四周常氧耐力训练、低氧暴露及低氧耐力训练，研究小鼠骨骼肌AMPK 磷酸化、PPARα mRNA和核内PPARα蛋白水平的变化，进一步揭示低氧运动对骨骼肌有氧代谢作用的分子调控机理，为运动员低氧训练的科学应用和低氧运动的大众健身减肥降脂新途径提供理论依据。 　　1.2实验方案和取材 　　常氧安静组：不施加运动负荷以及低氧干预，自由饮食、饮水；低氧安静组：每天8小时间歇低氧暴露于北京体育大学低氧房中（模拟海拔4 500 m高度，氧浓度约为11%）；常氧耐力训练组：常氧下每天1小时，每周6天，坡度为0，速度为12 m/min的跑台运动；低氧耐力训练组：低氧下进行常氧下耐力训练方案。实验周期为四周。 　　最后一次训练结束后12～16小时脱颈处死，取双侧股四头肌，锡纸包裹标记分组后，迅速投入液氮，再转移至-80℃冰箱保存。 　　1.3实验试剂、仪器和方法 　　1.3.1蛋白表达量的测定 　　1.4数据统计 　　所有数据均以平均数±标准差（Mean±SD）表示。统计分析使用SPSS 13.0统计学分析软件完成。同种基因型、不同运动组采用双因素方差分析；相同运动类型、不同基因型的各组用单因素方差分析。在满足方差齐性分析条件下，使用LSD法（Least-significant Difference）进行多重比较。结果用平均值±标准差表示。显著性差异为P0.05，非常显著性差异为P0.01。 　　2实验结果 　　3讨论 　　3.1低氧训练对小鼠骨骼肌AMPK磷酸化蛋白表达的影响 　　AMPK的激活是机体能量需求的“报警信号”。运动会引起ATP大量消耗，当AMP/ATP比值增加，AMPK开始发生变构后，易被其上游的LKB1激酶在Thr172位点磷酸化[4]激活。Cacicedo[5]等人发现小鼠在力竭跑台运动后，胸主动脉AMPK磷酸化（Thr172）水平增加了3.4倍。有研究