壳低聚糖对黄瓜叶片酚类代谢中酶活性的影响.pdfVIP

壳低聚糖对黄瓜叶片酚类代谢中酶活性的影晌 杜声亮张静伟+ 王春苹+付丽娟+ (河北廊坊师专生物系065000) 摘要本文利用微生物降解壳聚糖，制备以壳低聚糖为主要成分的培养液，以此为诱 0．96—_6．70、0．3l—1．4S倍。 关键词黄瓜壳低聚糖诱导物酚类代谢 酚类是植物重要的次生代谢物质，一般认为植物受到病原物侵染与干扰后，病 原物可诱导酚类物质的形成和积累，最后形成植保素。这是寄主植物对病原物很明显 激发了植物体内与酚类物质代谢有关的重要酶：苯丙氨酸解氨酶(PAL)，过氧化物 酶(PO)及多酚氧化酶(PPO)的活性有明显提高的现象fl’“。 蟹壳制各壳低聚糖，并以此作为诱导物提高植物抗御瘸害的能力，日益受到人们的重 视。 本文利用微生物降解壳聚糖，制各以壳低聚糖为主要成分的制剂，并以此为诱 导物处理黄瓜幼苗，测定了诱导对黄瓜叶片中与酚类代谢有关的PAL、PO、PPO酶 活性的影响。 材料与方法 1．1实验材料 I 黄瓜(cucumis 养液。 壳聚糖：河北黄骅渔业公司产品，纯化后测得其粘均分子量(jc瓦)为4．06×105： 脱乙酰度为71．4％。 壳聚糖降解菌：菌株BDH--95C(Paecilomycessp．)自筛。 1．2实验方法 。本系97轾学生奉系97纽学生盂繁辩、姚俄国、刘舂林也参与部分T作． ．355． 1．2．】壳聚糖降解产物的制各 ／ 菌株BDH--95C接种于1．5 200r／rain MgS04‘7H20各o．05％，K2HP04o．075％，FeS04o．001跖PH5．o)。28(2 振荡培养72h。培养液经G。玻璃滤器过滤后．滤液用于洌导实验。 1．2．2诱导处理 培养液喷洒幼苗至叶片挂水，一周后再重复一次。 1．2．3酶液提取 重复诱导处理后第三天，随机摘取受试黄瓜幼苗第L真叶209，按l：2(W／V) 加入蒸馏水，4℃条件下用高速组织捣碎机(DS200)捣碎(8000r／min z 3rain)，将叶片糜离心(4℃17000r／rain10rain323KHermleLabortechnikGrabH GosheimerStr’56D～78564 另外参照李靖等l”的方法制取PAL酶液，称第二真叶59．按1：5(wⅣ)加入 o．025mol／L PH8．8硼酸盐缓冲液及少量PVP后。冰浴中研磨，离心(条件同，L)后 取上清液用于PAL活性测定。 1．2，4酶活测定 参照文献f3】的方法测定黄瓜幼苗第二真时中PAL、PO、PPO的活性，本实验使 用TU—122l型紫外一可见分光光度计(北京背析通用仪器有限公司)测定，酶活单 位△ODmg。FW·rain。(FW示叶片鲜重1。 叠》霹 1．2．5壳聚糖降解产物组分分析 1．2．S．1 壳聚糖降解产物分级分离 定量BD}卜_95C培养液经G．玻璃滤 器过滤后，以0．1mol，LNaOH调Pit至 8．0，4℃静置12h，过滤除残余壳聚拼f(组 分1)o向滤液加入等量无水乙醇， 静