蛋鸡源奇异变形杆菌中沙门氏菌多重耐药基因岛SGI1分子流行病学研究.pdfVIP

四JIl省畜牧兽医学会2014年学术年会 蛋鸡源奇异变形杆菌中沙门氏菌多重耐药基因岛 SGll的分子流行病学研究 雷昌伟 张安云 刘必慧 王红宁+ 张冬冬 (四川大学生命科学学院，动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室；“985工程”西南资源环境 与灾害防治科技创新平台；生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川成都610065) 摘 要 沙门氏茵基因岛1(sGll)是沙门氏茵中一个42．4kb的可移动基因岛，其内部包含Inl04型复 杂整合子，介导氨苄西林、氯霉素和氟苯尼考、链霉素和壮观霉素、四环素及磺胺类耐药。sGll于2007年首 次被证实同时存在于奇异变形杆菌中。本研究旨在调查我国蛋鸡源奇异变形杆菌中sGll的分子流行情况， 并阐明其遗传结构。从我国11个规模化蛋鸡养殖场分离到64株奇异变形杆菌，采用PcR检测sGll在染 列，大小介于33．2到42．5kb之间。与目前已报道的sGll比较后发现，有三个是已报道的sGll，分别为 示sGll能在奇异变形杆茵中稳定存在。本研究探明了我国蛋鸡源奇异变形杆菌中sGll的分子流行特征， 为深入阐明SGIl的遗传进化提供了科学依据。 关键词奇异变形杆菌；基因岛；多重耐药；分子流行病学 1 引言 沙门氏菌(5nz啪珊耽)是肠杆菌科中一种重要的人畜共患病原菌。在养殖业中，沙门氏菌是一种重要的 病原菌，严重威胁养殖业的健康发展。在国内外各种食品安全问题中，沙门氏菌引起的食物中毒占据首位。 猪肉、鸡肉及鸡蛋等产品中营养成分丰富，沙门氏菌生长繁殖良好，污染了大量沙门氏菌的产品一旦被人类 摄入，会引起人类沙门氏菌感染，造成食物中毒，威胁人类健康。随着规模化养殖场抗生素的大量使用，沙门 氏菌耐药水平升高，给临床治疗带来严峻挑战。 基因岛是细菌基因组中10～200kb左右的DNA片段，是基因水平转移的产物之一，具有多样的生物学 功能，如改变细菌的致病性、异源物质降解、抗生素抗性、离子摄取和分泌活性等。沙门氏菌基因岛1(．S口z一 ，聊聊玩genomicisland(sGI)一1)是沙门氏菌中一个42．4kb的可移动基因岛，首次在鼠伤寒沙门氏菌DTl04 业(农业)科研专项经费项目(201303044，201403054)，四川省科技支撑计划项目(2013Nz0025)。 作者简介：雷昌伟，博士研究生，从事微生物分子生物学研究。 *通讯作者：王红宁，女，教授，博士生导师，从事动物疾病防控、微生物基因工程研究。whongning@163．com 已发表：Amim如r06谢A鲈n拈n蒯Ckr聊￡kro渺，2014 子，包含了5个耐药基因：6玩卧，留破、口口积2、s毪fl、锨(G)，分别介导氨苄西林、氯霉素和氟苯尼考、链霉素和 壮观霉素、磺胺类及四环素类耐药。目前发现的sGIl亚型主要由序列插入、转座以及可变区基因盒缺失或 交换等造成。 奇异变形杆菌属于革兰氏阴性、肠杆菌科细菌，广泛存在于人和动物肠道以及自然环境中，已成为我国 引起院内感染的一种重要病原菌。此外，一些肉类食品常常由于污染了奇异变形杆菌导致人使用后造成食 菌属外的其他属中。目前一些新的sGll亚型已在奇异变形杆菌中发现。由于SGll具有水平转移能力，奇 异变形杆菌中的sGll可水平转移到沙门氏菌中，促进多重耐药沙门氏菌的流行。此外，规模化养殖场中的 多重耐药奇异变形杆菌可通过动物食品进入人类食物链，给临床治疗带来困难。目前规模化养殖场中SGll 在奇异变形杆菌的流行情况尚不清楚。本研究旨在阐明我国蛋鸡源奇异变形杆菌中SGll的分子流行情况， 为深入阐明sGll的遗传进化提供了科学依据。 2材料与方法 2．1 蛋鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定 本研究中的奇异变形杆菌于2012年3月到12月分离自我国11个省的规模化蛋鸡养殖场送检的病死 鸡。采用接种环无菌挑取肝脏、心脏、脾脏、肺、肾脏、盲肠样品接种于血平板中，挑取可疑菌落划线于ss平 板上进行纯化。采用革兰氏染色、16SrDNA测序比对后对菌株进行鉴定。每一只病死鸡至多保留l株菌。 2．2药物敏感性试验 药敏试验采用美国临床标准委员会(cLSI)推荐的K．B纸片法进行，抗生素纸片包括氨苄西林(AMP)、 在MH平板上，用镊子将药敏纸片按一定间隔贴于平板上，37℃倒置培养16h量取抑菌圈直径，采用cL5I解 读标准进行结果判定。大肠杆菌ATCC25922作为药敏质控菌株。 2．3 1型整合子及SGll分子流行病学调查 采用煮沸法制备细菌DNA模