基因Ⅳ型猪源HEV+ORF3蛋白抗原表位初步筛选.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 EV0R 基因IV型猪源H F3蛋白抗原表位的初步筛选 王 衡，梁焕斌，记方晓，古洪浪，刘荣昌，张桂红+ (华南农业大学兽医学院，广东广州510642) 体随机肽库淘选技术，对本实验室制备并保存的一株抗HEVORF3单克隆抗体进行4轮淘选，最终获得8种在目 标区域编码不同12肽的噬茵体。经氨基酸序列比对发现，8种多肽中均含有与ORF3蛋白c末端一致的序列， 连续氨基酸，与其相距位置与ORF3C末端一致，所有筛选得到的疑似氨基酸序列集中位于ORF3C末端97位至 1 隆抗体结合。综上所述，本研究得到HEVORF3疑似表位VVDLP，其上序列SAPPLPP对其抗原具有影响。 关键词：猪戊型肝炎病毒；ORF3蛋白；噬茵体展示；抗原表位 E 戊型肝炎病毒(Hepatitisvirus，HEV)为单股正 链RNA病毒，可引发人类急性肝炎的出现。根据 ORF3作为一种分子量的较小的细胞骨架的磷酸化 蛋白，编码114个氨基酸，主要负责宿主细胞内环 其开放阅读框2(Open frame，oRF)进化树分 reading 析结果，可将HEV分为4个基因型，其中基因I型境的调节191以及病毒粒子的释放【10l。有研究表明， 和II型主要感染人类；而基因III型和IV型可以同ORF3蛋白具有很强的抗原性，对猪HEV阳性血清 时感染人类和其他动物，并主要分布于亚洲11之I。在 具有明显的特异性和敏感性【111。 我国，不但可以在人群和猪群中检测到HEV阳性 本研究将以抗猪源HEVORF3单克隆抗体为靶蛋 血清13-51，在牛、羊、马及宠物犬体内同样可以检测白，应用噬菌体随机肽库淘选技术，进行ORF3蛋 到该病毒阳性血清存在161。因此，目前普遍认为动 白抗原表位的初步筛选。该研究结果将为今后 物，尤其是猪，可作为HEV重要的储存器，通过其 ORF3免疫活性的研究、抗原表位的研究以及HEV 粪便污染水源，同时通过携带病毒的动物源性食物 检测方法的研究提供必要的试验条件。 (如未加工和未煮熟的动物肌肉和肝脏)进行病原的 传播1741。 1材料和方法 HEV具有一个7．2kb的基因组，含有3个开放 阅读框，分别为编码具有复制功能的多聚蛋白的 1．1 主要试剂 Ph．D．-12 PhageDisplayPeptide ORFl、编码病毒衣壳蛋白的ORF2以及编码具有调 l10SC，New LibraryKit(#ES England author *Corresponding 14404120010、201044041 基金项目：高等学校博士点学科专项科研基金(20l 10009)，广东省教育厅育苗工程 (2012LYM0031) 作者简介：王衡(1981-)，男，副教授． 4通信作者：E-mail：guihongzh@scau．edu．cn 一188— 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 洗涤后，加入200此HRP一标记的抗·M13antibody 记的抗．M13单克隆抗体(}}27—94ll—01，Pharmacia)； ORF3 in (1：5000 h。然后加入200斗L3，3’，5， 抗基因lV型猪源HEVIgGl亚型单克隆为本 TBST)作用1 实验室制备保存，O