布鲁氏菌SUMO-BCSP31重组表达菌的构建和免疫原性分析.pdfVIP

第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集  强免疫，使得筛选时杂交瘤细胞的阳性率明显高于单次加强免疫。但连续多次大剂量免疫有可能导致 免疫动物因过敏反应而死亡，故加强免疫时抗原的使用量需要小心摸索。 3.2 单抗的特异性 本实验获得的 4 株单抗均可识别光滑型羊种布鲁氏菌，与天然粗糙型布鲁氏菌不反应，与大多数 和布鲁氏菌有交叉反应性的其他菌株也不反应，特异性好。光滑型布鲁氏菌与粗糙型布鲁氏菌的差别 在于 LPS 的组成，粗糙型 LPS 仅由类脂 A 、核心多糖构成，不含有 O 链根据单抗的反应性，推测 6 株单抗识别的抗原表位位于光滑型 LPS 的 O 链。到目前为止 O 链表面有 7 个不同的抗原位点已见报 [7] 道，分别是 A 、M 、C （M=A ）、C （MA ）、C/Y （MA ）、C/Y （M=A ）、C/Y （AM ） 。由于抗原 化学结构的相同或者不同，会出现共同的血清学反应或表现出不同的血清学反应特性。本实验中，单 抗 III2C3 、II3E3 与羊种布鲁氏菌 16M （生物1 型，A- + + M ）、NI （生物3 型，A M+ ）反应而不与牛种 布鲁氏菌 2308 （生物1 型，A+ - M ）反应，提示这两株单抗识别的抗原可能是M 抗原，有待通过与不 同菌株反应进行后续验证。 3.3 单抗的亲和力 亲和常数是抗体性质的重要参数之一，测定亲和常数的方法有很多种，如硫氰酸盐洗脱法、竞争 结合法、非竞争 ELSIA 法、尿素洗脱法、生物传感器法等。本实验利用间接 ELISA 测定抗体的相对 亲和力，操作简单易行。 参考文献（略） 布鲁氏菌 SUMO-BCSP31 重组表达菌的构建及免疫原性分析 杨艳玲，郭利，王建科，孙娜，温永俊* （中国农业科学院特产研究所特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室，省部共建国家重点实验室培育 基地，长春，130112） 摘 要 目的意义：本研究欲对布鲁氏菌BCSP31 的免疫原性进行分析，为利用其作为诊断抗原研制布鲁氏菌病的新 型诊断方法提供科学依据。方法：利用原核表达的方法制备了布鲁氏菌BCSP31 蛋白的可行性表达产物SUMO-BCSP31， 并将原核表达菌与自然感染布鲁氏菌病的牛血清，免疫制备的小鼠血清进行免疫印迹分析，同时利用该重组表达菌免 疫小鼠，检测小鼠血清中抗体亚型IgG1 ，IgG2a ，以及细胞因子IL-2 和IFN-γ 的表达水平。结果：本研究成功地构建 了布鲁氏菌SUMO-BCSP31 原核表达载体，并在大肠杆菌BL21 中成功诱导表达。该重组蛋白能够和牛血清和小鼠血 清发生特异性的免疫反应。小鼠血清中IgG 亚型分析结果显示该抗原刺激小鼠产生了以IgG1 为主的体液免疫反应， 然而却没有诱导小鼠产生以IFN-γ 和IL-2 为主的细胞免疫反应。结论：本研究成功地表达了布鲁氏菌BCSP31 蛋白， 该蛋白具有很强的反应原性，同时刺激小鼠产生了高水平的体液免疫反应，说明该蛋白是具有高度的特异性，是布鲁 氏菌很好的抗原物质，可以用其作为布鲁氏菌的检测抗原来研制布鲁氏菌病的新型诊断产品。 布鲁氏菌病严重威胁着人和多种动物的生命健康，导致巨大的经济损失和严重的公共卫生危害。 布鲁氏菌病的快速诊断对于当前防控人畜布鲁氏菌病具有重要意义。目前人畜布鲁氏菌病的诊断方法 主要是虎红平板凝集试验和试管凝集试验，而这两种方法却存在着特异性差，检测结果假阳性高等缺 陷[1-2] 。鉴于ELISA 诊断方法的优势，因此寻找特异性抗原研制快速敏感的布鲁氏菌病 ELISA 诊断方 法对当前动物布鲁氏菌病的净化清群具有十分重要的意义。 布鲁氏菌表面蛋白 31 （Brucella cellsurface protein 31 ku, BCSP31 ）基因于 1988 年被克 隆测序和体外表达，它编码了大小为 31 ku 具有免疫原性的可溶性