碘试液比色法测定α-淀粉酶抑制剂活性.pdfVIP

江苏农业科学 2015年第43卷第 1期 一 3O1一 谢雨杉，李多伟，李银芳，等．碘试液比色法测定a一淀粉酶抑制剂活性[J]．江苏农业科学，2015，43(1)：301—303 doi：10．15889／j．issn．10o2—1302．2015．01．100 碘试液比色法测定 一淀粉酶抑制剂活性 谢雨杉 ，李多伟 ，李银芳 ，智彩辉 (1．西北大学生命科学学院，陕西西安710068；2．陕西省西安蓝晓科技新材料股份有限公司，陕西西安710075) 摘要：建立 一淀粉酶抑制剂活性的碘试液比色测定方法，对淀粉基质液浓度、反应温度系列试验条件进行确定。 结果显示，最佳测定条件为淀粉基质液浓度为2．5％，酶促反应的最适温度40℃，平均回收率为99．03％(n：6)，精密 度RSD=1．82％。可见，该测定方法简便、快捷、重复性良好，可作为 一淀粉酶抑制剂活性的常规测定方法。 关键词：白芸豆；碘试液比色法；or一淀粉酶抑制剂活性 中图分类号：TS201．25 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2015)Ol一0301—02 一 淀粉酶抑制剂 (Ot—amylaseinhibitor，简称a—AI)属 用蒸馏水溶解 ，定容至 1000mL。 于糖苷水解酶。胃肠道内唾液胰淀粉酶的活性能被 一AI 1．2。2 碘试液的配制 称取0．317g碘溶于4mL25％碘化 有效抑制，人体对食物中主要碳水化合物的水解和消化受到 钾溶液中，加蒸馏水至200mL，取 10mL加入至25mL25％ 阻碍或延缓，降低了食物中淀粉糖类物质的分解吸收，起到了 盐酸中，再用水稀释至500mL。 降低血糖、血脂作用并抑制了血糖浓度的升高，在糖尿病患者 1．2．3 1．5％可溶性淀粉溶液的配制 准确称取 105oC干燥 的饮食治疗中起到了很好 的作用；Ot—AI可减少糖向脂肪转 4h的可溶性淀粉3．0g，加20mL蒸馏水使成混悬液，然后缓 化 ，延缓肠道排空，增加脂肪消耗，对肥胖患者减轻体质量也 缓倒入约 100mL沸水中，溶解后煮沸至清亮透明，放冷，加 起到了很好的作用。因此 ，—AI可以用来防治糖尿病、动脉 40mL0．2mol／L乙酸盐缓冲液(pH值5．6)，用蒸馏水稀释 硬化症、高血脂、脂肪过多症及肥胖症 。从白芸豆中获得 至 200mL。 Ot—AI具有高效价及耐热性而倍受关注 。 1．2．4 淀粉基质液的配制 10mL1．5％可溶性淀粉加 1mL Ot—AI能特异性抑制Ot一淀粉酶，从而减少 “一淀粉酶对 蒸馏水混合，取其0．1mL于 10mL碘试液中，立即混合后于 淀粉的水解，碘试液与淀粉呈蓝色反应 ，并在一定波长下有最 波长620llln处测定吸光度，取吸光度为0．9—1．0的1．5％可 大吸光度。通过定量测定添加抑制剂前后淀粉量的变化可测 溶性淀粉溶液作为淀粉基质液。 得a～AI的活性 。本研究对碘试液比色法测定 一淀粉酶 1．2．5 酶稀释液的配制 1．641g乙酸钠、0．176g乙酸钙及 抑制剂活性的试验条件进行系列试验，以期寻找最佳试验条 5．84g氯化钠溶于约800mL蒸馏水中，用 1mol／L乙酸调至 件，为Ot—AI的科学研究和生产检测提供可借鉴的参考数据。 pH值为6．0后加蒸馏水至 1000mL。 1．2．6 一淀粉酶试样溶液的配制 准确称取0．5g 一淀 1 材料与方法 ’ 粉酶 (购于北京奥特星生物技术有限责任公司)，加酶稀释液 1．1 仪 器 溶解至 100mL，在40℃水浴中悬保温2h后备用。用下述活 德国赛多利斯 ME235S一电子分析天平 ；上海医疗器械 性测定法进行预试验，试验溶液的蓝色全部消失并变为红色 五厂H ·H ·$21—6C电热恒温水浴锅；上海博迅公司TH