碱性木聚糖酶热稳定性及半衰期研究.pdfVIP

陕西农业科学2015，61(02)：18—21 ShaanxiJonrn~ofAgriculturMSciences 碱性木聚糖酶热稳定性及半衰期研究 问清江 ，慕 娟 ，党 永 ，胡世浩 ，颜阳欣 ，贺聪莹 (1．陕西省微生物研究所，陕西 西安 710043；2．长安大学环境科学与工程学院，陕西 西安 710064； 3．西北大学生命科学院，陕西 西安 710068) 摘 要 ：目的：通过碱性木聚糖酶热稳定性的研究探究其半衰期和保质期。方法：首先对碱性木聚糖酶溶液 的热稳定性进行研究，然后再进行碱性木聚糖没固体制剂 的热稳定性研究，最后应用一级动力学模型得 出各 自的半衰期和保质期。结果：碱性木聚糖酶溶液的温度范围6O～70cc，热处理时间 1—6rain．6min后残留酶 活最高为35．87％ 一0，25℃的半衰期和保质期分别为 13．73d和 2．08d；碱性木聚糖酶固体制剂的温度范围 100～120oC，热处理时 间 1～6h，6h后残留酶活为 81．96％ ～25．99％，25℃ 的半衰期和保质期分别为 4920．37d和748．25d。结论：碱性木聚糖酶固体制剂具有良好的热稳定性，保质期优于酶制剂国家标准。 关键词 ：碱性木聚糖酶 ；热稳定性 ；半衰期 碱性木聚糖酶在碱性条件下将木聚糖降解为 1．2 方法 木寡糖和木二糖等低聚木糖、极少量木糖和阿拉 1．2．1 碱性木聚糖酶溶液的热稳定性 称取碱 伯糖，其为 p一1，4一D一内切木聚糖酶 (1，4一B 性木聚糖酶固体制剂 0．1000g，溶于pH8．0，0．05 —endo—xylanase，EC．3．2．1．8)，是木聚糖水解 MTfis—HCL缓冲液中，充分溶解并定容至 100mL 酶系的主要酶。碱性木聚糖酶可用于造纸业的纸 为碱性木聚糖酶溶液。向编号为 1，2，3，4，5，6的 浆生物漂 白和纸浆脱墨、苎麻等天然纤维加工等 试管中分别加入 1mL碱性木聚糖酶液，然后同时 领域，可以减少相关企业废水中的化学物，有利于 放人恒温水浴锅中计时，1min，2min，3min，4min，5 环境保护。热稳定性关系到碱性木聚糖酶制剂的 min，6min依次取出 1—6号试管，立即放人冰水浴 生产、贮存及应用，利用喷雾干燥法制备酶制剂， 中冷却5min，测定试管中酶液的碱性木聚糖酶活。 酶制剂半衰期和保质期，碱性木聚糖酶使用条件 选取60℃，62，5℃，65℃，67．5℃和70c=【为热处 的确定等均与酶的热稳定性密切相关。以短小芽 理温度 ，每个温度3组平行试验。 胞杆菌发酵生产的碱性木聚糖酶产品为对象，通 1．2．2 碱性木聚糖酶固体制剂的热稳定性 称 过其溶液和固体酶的热稳定性试验 ，进行各 自的 取7份碱性木聚糖酶固体制剂 0．1000g，分别放 耐热性、半衰期及保质期研究，为碱性木聚糖酶产 入编号为0，1，2，3，4，5，6的试管中，将 1—6号试 品开发提供技术储备。 管同时放入恒温干燥箱中，并开始计时，1h，2h， 3h，4h，5h，6h依次取出放入冰水浴中冷却 5 1 材料与方法 min，0号试管作对照，测定试管中样品的碱性木 1．1 材料 聚糖酶活。选取 100cI=，105℃，110℃，115℃， (1)碱性木糖酶(陕西省微生物研究所)。 和120oC为热处理温度，每个温度3组平行试验。 (2)桦木木聚糖(bnchwoodxylan)，Sigma公 1．2．3 碱性木聚糖酶酶活测定… 具体测定方 司产品；3，5一二硝基水杨酸(DNS)