IgG磁性纳米微球载体制备与应用.pdfVIP

140 2011年第四届国际食品安全高峰论坛论文集 IgG磁性纳米微球载体的制备与应用木 石良王锡昌卢瑛” (上海海洋大学食品学院，上海201306) 平均水力学粒径变化率为135．55％，分散性能变差。以检测水产品中甲壳类主要过敏原原肌球蛋白评价磁珠表面的抗 体生物学活性结果显示：优化条件下制备的磁珠A和B表面的抗体均具有较好的抗原结合活性，磁珠B的磁信号强于 磁珠A，但是层析效果不如磁珠B两者在免疫层析试验中均具有应用可行性。综上所述，抗体修饰磁珠用于免疫层析 检测时，抗体修饰前后磁珠粒径和分散性能的变化、材料的磁响应性能对于检测灵敏度和层析速度具有重要意义。 关键词：微球，生物修饰，Ⅱ)C，免疫层析 学科分类号lQ819 适用于免疫层析检测的羧基化磁珠的表面生物修饰方法。 超顺磁性纳米微球(Superparamagneficnanoparticles。 SMNs，简称磁珠)的主要特点是在外加磁场的作用下可 以被磁化而显示出磁性，能够被迅速分离出来。当外加 l材料与方法 磁场撤离后它没有剩磁因而又可重新分散到液体中，其 1．1材料 生物相溶性和悬浮稳定性较好[1l。生物活性分子可通过 ensis)购自上海泥城集 刀额新对虾(Metapenaeus 磁珠表面的官能基团结合到SM卜b上，应用于分离、检 测和临床诊断等领域中【I棚，是医学、分子生物学、免疫 (上海生工)、无水吗啉乙磺酸(MEs，Sigma公司)； 学等研究中的霞雪载体工具。另外，研究显示SMNs结 山羊抗鼠IgG(杭州隆基生物公司)；其它均为国产分析 合免疫层析技术和磁性分析系统可以实现定量的快速检 纯试剂；原肌球蛋白及抗原肌球蛋白单抗为实验室自行 测，目前在人促绒毛性腺激素、心肌肌钙蛋白及HIV病 制备纯化；Protein G亲和层析柱(GE公司)；羧基化 毒等的快速检测中已有相应报道17-91。 磁珠A、样品垫、结合垫、硝化纤维膜、吸水纸、PVC 根据表面化学基团的不同，磁珠可采用不同的化学 交联剂，如醛类(甲醛、戊二醛等)、碳化二亚胺类、双环 海奥润微纳公司)。 氧类物质以及氰异酸盐等【lo】进行生物分子的修饰。羧基 磁信号检测仪(Magneticassayreader，MAR)(美 化磁珠表面生物分子的修饰以碳二亚胺类中的1．乙基． (3．二甲基氨基丙基(EDC)缩合法最为常用。G-∈linas分析仪(英国Malvem公司)。 1．2方法 等【ll】成功地将Diethylenetriamine(DETA)配体固定到羧 基化磁珠的表面，发现蛋白质在功能化磁珠表面的偶联 1．2．1原肌球蛋白及其特异性单克隆抗体的分离纯化 率、生物学活性及磁珠粒径的变化均会直接影响到其应 虾类主要过敏原Tm的纯化参照蔡秋风掣13l的方法并 anti．mouse。GAM)稍作修改。抗Tm的单抗【141为实验室前期研究成果，采用 用效果[11-121。本文以山羊抗小鼠(Goat IgG为模式蛋白，以EDC与磺 ProteinG亲和层析柱，按照产品操作说明进行纯化。 1．2．2磁珠的表面生物修饰 酸基琥珀酰亚胺(sulfo-NI-IS)为交联剂，对羧基化磁 珠表面抗体的修饰条件进行了优化。此外，通过比较不 羧基化磁珠的表面GAM IgG生物修饰采用EDC 同种类磁珠在修饰甲壳类主要过敏原原肌球蛋白