注射用阿胶低肽制备工艺研究.pdfVIP

2009·全国中药创新与研究论坛·论文集 参考支：献： [1】雷载权，中药学[M】．1999：304 12l郭成浩，金毅，祁玉成，等邝可胶结构与药理功能研究进展【J】．青岛医学院学报．1998，34(4)：310 13l王志海，何秀敏，吴斌．阿胶补血作用机理初探fJ】．山东中医杂志．1992，11(3)：35 【414李良铸．生化制药学[M】．北京：中国医药科技出版社，1991，第一版：201～206． 15l徐杰伟，温少磊，蔡早育．考马斯亮蓝法测定微量蛋白的条件探讨田．江西医学检验，2003,21(5)：353·354． 16l黄楚华，殷学伦．超滤法制备胎盘肽的初步研究[J】．中国生化药物杂志，1994，2． 17l郭春腾，宁千年．硫酸铵盐析在蕲蛇毒凝血酶样酶分离中的应用阴．福州大学学报(自然科学版)，2002，1． 注射用阿胶低肽的制备工艺研究 付英杰田景振 (山东中医药大学药学院，山东济南250355) 摘要：目的优选阿胶酶解条件、酶提液的超滤工艺，注射用阿胶低肽的制备工艺。力诘首先对阿胶5％水溶液用硫 酸铵进行提取前处理；然后以考马斯亮蓝测定的总肽浓度为指标，对胃蛋白酶酶量、胃蛋白酶酶解时间、胰蛋白酶 酶量及胰蛋白酶酶解时间4个冈素设计正交试验确定最佳酶解工艺；然后考察超滤工艺，最后进行冷冻干燥。结果 硫酸铵用浓度30％进行提取前处理以去除油脂等杂质，并用分子量截留值为3kD的超滤柱进行脱盐；注射用有效分 酶酶量10万咄、胃蛋白酶酶解时间为2小时、胰蛋白酶酶量为5千雌、胰蛋白酶酶解时问3小时；超滤工艺为用 3kD超滤柱，收集浓集液及一次水洗液。结论制备了注射用阿胶低肽，此制备方法得到的阿胶低肽的分子量在2kD 左右。 关键词：阿胶低肽：酶解；超滤 asinus 阿胶，为马科动物驴(EquusL．)的皮经煎煮、浓缩、晾干制成的固体胶。性甘平。功效 补血止血、滋阴润燥[11。经现代研究，证明阿胶中主含氨基酸和肽类脚，占干重的80％。另外含多 种微量元素，以Fe、Cu为最高。阿胶中大分子物质需要在蛋白酶的作用下分解为小分子肽或氨基 酸才能被吸收，要消耗一定量的蛋白酶，所以有“滋腻碍胃”之说。此外，阿胶原粉入药剂量大，且 有效部位及其特性不明确，故无法衡量提取工艺的合理性。为此在总结前人的研究经验基础上，本 课题从研究阿胶的提取纯化方法入手，采用模拟阿胶在人体内消化酶解【3】的提取方法，考察低肽量 与升血作用之间的关系，以低肽量为指标，跟踪筛选阿胶水解产物的有效部位。再结合膜分离技术、 葡聚糖凝胶分离技术、I-IPCE等手段，找出阿胶作用的有效成分或有效成分群。建立质量标准。另 将有效部位制成注射剂，以升血药效学实验验证其体内作用，最终完成阿胶低肽注射剂的研制。 l仪器与试剂 1．1仪器中空纤维超滤装置(中空纤维柱规格型号003W，配合蠕动泵型号CL-25，北京市旭邦膜 设备有限责任公司)；全自动血细胞计数仪(曼特诺MTN一61)。SYC．15超级恒温水浴(南京桑力电 132 2009·全国中药创新与研究论坛·论文集 紫外分光光度计(日立u坼3010)。 购于国药集团化学试剂有限公司)；牛血清白蛋白(Albumin，BovineBiotech，批号：B67328，购于 Ultra BrilliantBlueG．250 上海生工生物工程有限公司)；考马斯亮蓝(Coomassie Pure，批号：0241875， 151)，氯霉素(药用)以上 购于上海生工生物工程有限公司)。环磷酰胺(规格0．29／支，批号0501 利用超滤自制。其他试剂均为分析纯。 1．3动物 学动物供应中心提供。 2方法与结果 2．1不同分子量段致敏性研究 方法：取豚鼠30只，体重2503509，平均分为5组。各组隔日分别静脉注射lml分子量段为 后各组再随机分成两组，分别在第一次注射后14天及21天从静脉注射阿胶低肽溶液2ml(