【创新设计】2014-2015学年高二生物人教版选修1课件：5-2 多聚酶链式反应扩增DNA片段.pptVIP

【例2】 使用PCR仪具体实验操作顺序应为 (　　)。 ①设计好PCR仪的循环程序　②按配方准备好各组分 ③用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分　④进行PCR反应　⑤离心使反应液集中在离心管底部 A．②③⑤④① B．①⑤③②④ C．②③⑤①④ D．④②⑤③① 思维导图： PCR技术实验操作及注意事项 深度剖析　PCR反应的操作步骤一般分为准备(包括配制配方及将各配方放于实验台上)—移液—混合—离心—反应。因PCR仪是一种自动控制温度的仪器，设计好循环程序就可以进行反应了。 答案　C 单击此处进入 随堂达标检测 教材P63 1．提示　绘图可参考教科书中图5－9。PCR反应中的DNA片段一般以2n的方式积累，其中n为反应循环次数。一个DNA片段在30次循环后反应物中大约有10亿个这样的片段(2n＝230＝1 073 741 824)。 解析　PCR扩增DNA片段可以使目的片段呈指数增长。 2．提示　根据已知DNA序列设计引物，因为PCR扩增的是两种引物之间的特定DNA序列。 解析　PCR引物是根据需要扩增的目标DNA的碱基序列来设计的。引物的设计需要丰富的分子生物学实践的经验。 热点考向示例 随堂达标检测 课堂互动探究 教科书问题解答 课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 课程标准 尝试PCR技术的基本操作和应用。 课标解读 1.理解PCR技术的基本原理。 2.知道PCR技术的基本操作过程。 3.讨论PCR技术的应用。 1．生物体内DNA分子复制的条件 (1)四种 是合成子链的原料。 (2) 提供了DNA复制的模板。 (3) 打开了DNA双链。 (4) 催化合成DNA子链。 (5) 使DNA聚合酶能够从 开始连接脱氧核苷酸。 PCR技术的原理及反应过程 脱氧核苷酸 DNA母链 解旋酶 DNA聚合酶 引物 引物的3′端 2．PCR扩增的原理及条件 (1)概念 PCR即 ，是一种 迅速 的技术。它能以极少量的 为模板，在短时间内复制出上百万份的 。 (2)原理 ①DNA的热变性：在 的温度范围内，DNA双螺旋结构解体，双链分开，这个过程称为 。当温度缓慢 后，两条彼此分离的DNA链又会重新 。 ②子链的合成：a.需要 ；b.合成方向总是从子链的 端向 端延伸。 多聚酶链式反应 体外 扩增DNA片段 DNA DNA拷贝 80～100℃ 变性 降低 结合成双链 引物 5′ 3′ (3)条件 ① 模板。 ②分别与模板DNA两条模板链相结合的两种 。 ③A、T、G、C四种 。 ④耐热DNA聚合酶，一般用 。 ⑤需要一定的 和能严格控制 的温控设备。 DNA 引物 脱氧核苷酸 耐高温的TaqDNA聚合酶 缓冲溶液 温度 3．PCR反应过程 PCR一般要经历 次循环，每次循环可以分为 、 和 三步。 (1) ：当温度上升到 以上时，双链DNA解聚为单链。 (2) ：温度下降到 左右， 通过 与两条单链DNA结合。 (3) ：温度上升到 左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在 的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA 链。 三十多 变性 复性 延伸 变性 90℃ 复性 50℃ 两种引物 碱基互补配对 延伸 72℃ DNA聚合酶 [思维激活1] DNA复制缘何必须有引物？ 提示　DNA聚合酶不能从头合成DNA，而只能以3′延伸DNA链，故DNA合成时，必须加入引物(其3′游离)以作