鸭瘟病毒dUTPase基因发现、分子特性和转录分析.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次学术研讨会论文集(下册)(2008年河南新乡) 同时结合使用PI拒染法(冈坏死细胞PS亦暴露予细胞膜外测，且对PI高染)进行凋亡细胞双染法后用 V V、PI均低染；凋亡细胞An鹏xill 流式细胞仪即可检测凋亡细胞。结果判断：正常活细胞AnnexJm 高染、PI低染；坏死细胞Am[1exJaV／PI均高染，该方法特异性好，是目前准确率最高的检测方法。荧 在荧光显微镜下，正常活细胞不激发荧光；凋亡细胞激发绿色荧光；坏死细胞激发红色荧光。这5种 检测方法相辅相成，可以定性及定量的检测凋亡细胞。为本实验提供可靠的依据。 亡期，DNALMder检测结果基本对应了以上结果(根据此法只能半定量的检测凋亡细胞，更加精确 的结果应参考流式细胞术)，其原因是病毒感染宿主细胞后，由于病毒自身结构简单．必须利用宿主 的能量和物质来进行复制、装配；而细胞在病毒感染后发生凋亡是机体的一种保护反应，有助于维 持正常的生理功能，是宿主对病毒的抵抗机制之一。凋亡的发生对于病毒的大量复制显然是非常不 利的，是对周围未感染细胞的一种保护性机制，病毒为了存活必须具备各种调节凋亡的机制来面对 宿主发生的这种内在化的程序化细胞死亡，以便使凋亡向有利于病毒生存和复制的方向发展。因此t 经过长期的选择和进化，在感染早期很多病毒具有抗凋亡的机制来阻止或延迟病毒感染的细胞发生 凋亡，这段时期有就是本实验中的接毒后0h到24h的这段时期；而在感染中期，当它们已产生足够 多的子代病毒时，就促进凋亡，加速病毒扩散，这段时期有就是本实验中DSHDV感染后48～120h 这段时期，在病毒感染的后期，由于病毒增殖和营养物质的消耗，细胞主要为坏死变化。对应本实 验中的144h这个时间。关于病毒感染导致宿主细胞凋亡发生规律的研究，可以对病毒性疾病的发 病原因和发病规律作更深层次的理解。 参考文献(27篇，作者略) 鸭瘟病毒dUTPase基因发现、分子特性及转录分析 招丽蝉P，袁桂萍3，程安春122P，汪铭书1∥‘，贾仁勇1，周登春1，陈虹1，葛菡1 (1．四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心，雅安，625014；2．动物疫病与人类健康四川省重点 实验室，雅安，625014；3．四川大学分析测试中心，成都，610064) 摘要：本文应用大量生物信息学分析工具以及RNA斑点杂交技术对本实验室在构建鸭瘟病毒(Duck plague 8a，包含duTPa舱家族蛋 了分子特性及转录时相分析。研究表明：该基因大小为1344bp，编码477 CHvdUTPa∞基因 白的5个保守motifs，排列形式3．1-2-4．5具备II型dUTPase的典型特征。DPV 在25个疱疹病毒参考株之问高度保守，并与a疱疹病毒的氨基酸同源性较之与P、^r疱疹病毒要高。 DPVCHv 随后转录产物量迅速放大，4小对迭高峰，24小时后下降至相对低的水平．该研究对阐明病毒基因 表达调控机理提供了有用的实验数据，并对病毒其他基因的发现和研究具有指导性意义． 关键词：鸭瘟病毒；dLrTPase；分子特性：转录分析；斑点杂交 and ofdUTPase characterization Discovery，molecular transcriptionanalysis isolatedfrom gene DPVCHv ZHAOLi-chanl：YUAN Haal Gui—pin矿CHENGAn-chun讲：WANGMing-slml≯,JIARen-yong‘，ZHOUDmng-chtml，CHENHo