半滑舌鳎Gadd45g3基因的克隆与表达分析.pdfVIP

中国水产科学 2014年 9月，2l(5)：863—871 JournalofFisherySciencesofChina 研 究论文 DoI：10．3724／SP,J．1118．2014．00863 半滑舌鳎 Gadd45g3基因的克隆与表达分析 刘万军 一，张丽燕2，邵长伟2，王凯琳2，齐茜 ，陈松林2，温海深 1．中国海洋大学 水产学院，山东 青岛 266003； 2．中国水产科学研究院 黄海水产研究所，山东 青岛 266071 摘要：生长阻滞和 DNA损伤诱生蛋 白45(growtharrestandDNAdamageinducibleprotein45，Gadd45)基因在 胚胎发育和性别决定 中起重要作用 。本研究通过 RACE方法在半滑舌鳎 (Cynoglossussemilaevis)中克隆得到了 1个 Gadd45g同源基因，命名为 Gadd45g3。该基 因全长 1147bp，编码 155个氨基酸残基 。氨基酸序列分析 表 明，半滑舌鳎 Gadd45g3与其他鱼类 Gadd45g．1ike的同源性为 79％～88％，与硬骨鱼和高等脊椎动物的 Gadd45g 同源性为 58％～67％。对多个物种 的 Gadd45g 同源基因的 CDS区进行 Ka／Ks分析，发现 Ka／Ks均小 于 0．3。FISH结果显示，半滑舌鳎 Gadd45g3基因位于常染色体上。实时荧光定量 PCR结果显示，Gadd45g3 在雌雄成鱼 的脑 中都有很高的表达，说 明其参与了神经发育；在成熟性腺 中，Gadd4593的表达具有精巢特异 性，说明Gadd45g3是性别相关基 因；而在不同发育时期的性腺 中，Gadd45g3的表达量在孵化后 20d的雄性仔 鱼 中显著高于 同龄雌鱼(尸0．05)，但在孵化后 95d的雌雄仔鱼中均有高表达，说 明在半滑舌鳎性别决定和性 腺发育中起着重要作用。 关键词：半滑舌鳎；Gadd45g3；KaK／s；性别决定；荧光原位杂交；克隆；表达 中图分类号：$917 文献标志码：A ， 文章编号：1005—8737一(2014)05—0863—09 生长阻滞和 DNA 损伤诱生蛋 白 45 (growth Gadd45g基因在原代神经元中高表达 卜J，参与 arrestand DNA damage inducible protein 45， 细胞周期调控，促进神经细胞分化，并参与神经 Gadd45)基因家族是DNA损伤修复的重要基因1【】。 器官的形成 引。德国Mainz大学分子生物学研究 该家族拥有 Gadd45a、Gadd45b和 Gadd45g (即 所的科学家发现，缺乏 Gadd45g基因的雄性小鼠 Gadd45y)3个成员，三者的氨基酸序列同源性较 性别完全反转 [1 ，表现出雌性小鼠的体貌特征， 高，它们编码的蛋白质在细胞周期停滞、细胞凋 最终确定了Gadd45g蛋白是启动雄性性器官发育 亡、衰老 一和 DNA 的脱 甲基[一过程中起重要 所必需的。在鱼类 中，Gadd45g—like基 因作为 作用，但具体功能、表达模式和刺激诱导物 J均不 Gadd45g基因的同源基因，虽然 已被发现，但关 同。作为 Gadd45基 因家族 的重要成员之一， 于该基因在鱼类中所起的作用却未见报道。 Gadd45g基因的早期相关研究主要集中于它在肿 半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)是一种名贵 瘤 中的作用。进一步研究证实 Gadd45g[ 不 海水鱼类，其肉质鲜美，具有极高的经济价值和市 是维持生命活动的必需基因，但在多个物种的胚 场前景，因而成为优 良的增养殖对象 1【引。半滑舌鳎 胎发育和性别决定中发挥作用。在胚胎发育时期， 雌雄个体生长差异显著 ，雌性幼鱼发育较早，且 收稿 日期：2014．02．22；修订 日期 ：2014．04．01． 基金项 目：国家 863计划项 目(2012AA092203，2012AA10A403—2)；国家 自然科学基金项 目41006107)；山东省泰山 学者工程专项． 作者简介：刘万军(1987一)，男，硕士，主要从事海水鱼类 良种选育及基 因发掘研究．E—mail：liuwanjunl11@aliyun．co