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现代液相色谱 色谱法简介 高效液相色谱 液相色谱分离原理 液相色谱仪组成 简单介绍液固吸附色谱、液液分配色谱、离子交换色谱 第一位认识到色谱法是一种有效的分离方法的科学家是俄国植物学家Tswett.他1903年发表的文章描述了用100多种不同吸附剂得到的实验结果。 1931年 Kuhn和Lederer用氧化铝和碳酸钙做吸附剂分离了植物色谱。 按照不同的相可以分为气-固色谱法，气-液色谱法（GLC），临界状态色谱法，液-固色谱法，液-液色谱法。 现代液相色谱 现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9?107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。 液相色谱分离原理 液相色谱分离系统由两相—固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子（溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。 根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成 产品编号：C10922 产品名称：高效液相色谱仪 产品型号：P680 原产地：德国戴安 参考价格：158000 各部分组成简介 一、高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表 等组成。 二、进样系统包括进样口、注射器和进样阀等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。 三、分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2 ~ 6mm，柱长为10 ~50cm，柱形多为直形，内部充满微粒固定相。柱温一般为室温或接近室温。 四、检测器是液相色谱仪的关键部件之一。对检测器的要求是：灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。 高效液相色谱的固定相和流动相 固定相 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分可分为刚性固体和硬胶两大类。 刚性固体以二氧化硅为基质，可承受 7.0?108~1.0?109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5?108Pa。 流动相 由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲合力，并参与固定相对组分的竞争，因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度 对流动相溶剂的要求是： （1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选 择性。 （2）溶剂与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选 用检测器波长比溶剂的紫外截止波长 要长。 （3）高纯度 由于高效液相色谱灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也 要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳或产生“伪 峰”。 （4）化学稳定性好 （5）低粘度（粘度适中） 若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。常 用的低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等；但粘度过低的溶剂也不宜采用，例如戊烷和乙醚等，它们容易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离。 液—固色谱法 一、液固色谱的固定相是固体吸附剂。 吸附剂是一些多孔的固体颗粒物质。固体吸附剂按其性质可分为极性和非极性两种类型。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。 最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝 在现代液相色谱中，硅胶不仅作为液固吸附色谱固定相，还可作为液液分配色谱的载体和键合相色谱填料的基体。 二、选择流动相的基本原则是 极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。 液液色谱法 在液液色谱中，一个液相作