连梅汤干预2型糖尿病大鼠脂肪组织SREBP-1c、FAS表达实验研究.pdfVIP

连梅汤干预2型糖尿病大鼠脂肪组织 SREBP-Ic、FAS表达的实验研究 朴春丽韩笑 长春中医药大学附属医院内分泌科吉林省长春l30021 表达的影响。方法：将成模OLETF大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、连梅汤方组，以LETO 的表达，结果：连梅汤组的脂肪组织SREBP-Ic、FAS蛋白及mRNA表达水乎较模型组明显减 蛋白及mRNA表达的作用。 【关键词】连梅汤；2型糖尿病；脂代谢紊乱；SREBP-lc；FAS；实验研究 固醇调节元件结合蛋白一Ic(sterolelement protein-lc，SREBP—Ic)，是 regulatorybinding 一种核转录因子，主要参与调控脂肪酸、TG合成以及糖代谢相关酶基因的表达，其中受其 acid 调控的脂肪酸合成酶(fatty synthase，FAG)是脂肪酸合成中的关键环节，二者在调控脂 肪代谢中起着重要作用。本实验采用免疫组化和实时荧光定量PCR技术从蛋白和基因水平对 OLETF大鼠腹腔脂肪组织中SREBP—lc及FAS的表达情况进行观察，以进～步探讨脂代谢紊 乱在T2DM中的作用机制，并观察连梅汤的疗效，探讨其作用靶点。 1材料与方法 1．1实验材料 1．1．1实验动物 以4周龄OLETF大鼠和同周龄LETO大鼠为实验对象。大鼠皆为雄性，OLETF大鼠40只， LETO大鼠10只，由日本大冢制药株式会社德岛研究所引进。 大鼠在中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心无特定病原体(specific 湿度为55±5％，12／12小时光照黑暗循环(光照时间7：00-19：00)，自由获取食物和饮水。 1．1．2主要试剂及仪器(略) 1．2实验方法 1．2．1分组及给药 264 1．2．1．1OLETF大鼠DM诊断分组标准 大鼠定期行OGTT。试验前隔夜禁食15h、不禁水，按29／kg予30％葡萄糖溶液灌胃(取 葡萄糖粉82．59，加蒸馏水定容至250m1，加热溶解为清亮液体，得到浓度为30％葡萄糖溶 具备上述一条者为糖耐量减低。 1．2．1．2实验动物分组及给药 至30W时，共有成模OLETF大鼠27只，随机分为模型组、二甲双胍组、连梅汤方组， LETo大鼠为空白对照组。二甲双胍组：给药剂量为3mg／kg／d。连梅汤，灌胃剂量为9mg／kg／d。 模型组与空白组以等量蒸馏水灌胃，各组均灌胃给药12周，每日1次。 1．2．2标本采集 剖杀大鼠，提取腹腔脂肪组织分别制成石蜡切片及液氮冷冻的脂肪组织标本。 1．2，3 SREBP-Ic、FAS蛋白检溅 采用免疫组织化学染色法检测SREBPI-c、FAs蛋白表达，经固定、脱水、透明、浸蜡、 包埋制成切片，采用TBS代替一抗作为空白阴性对照。脂肪细胞胞浆内出现棕黄色颗粒为阳 性。采用医学图像分析系统分析，测量平均光密度(meanopticaldensity，MOO)值代表 单位面积细胞该物质的表达量，最后以每组的均值比较。 1．2．4SREBP-le、FAS mRN^的检测 组织总RNA的提取、分光光度法测定核酸的浓度、IiNA样品反转录及荧光定量PCR检测，实 验结果以内参基因与目的基因的Ct值比值作为目的基因的mRNA相对表达量。 1．2．5统计方法 采用SPSSl6．0软件作统计分析，实验数据计量资料以均数±标准差(X±S)表示， 服从正态分布的两组间均数比较用t检验进行统计，同批次多组间比较采用单因素方差分析 (One-wayAN0vA)，两两比较采用最小显著差法(LSD)。 2结果 2．1实验动物一般情况 活动迟缓、懒动、毛色干祜无光泽。 2．2大鼠脂肪组织中SREBPI-c、FAS蛋白表达情况 265 2．2．1大鼠脂肪组织中SREBPI-c蛋白表达情况 免疫组化结果显示，SREBPI-c的免疫反应阳性产物为棕黄色颗粒，表达于脂肪细胞胞 浆内。LETO大鼠的脂肪细胞内SREBPl一C的表达区域较局限，强度较弱。模型组大鼠的 SREBPI-c的表达显著增强，连梅汤组二与甲双胍组表达