带有GFP标签的油松苯丙氨酸解氨酶基因表达载体的构建.pdfVIP

西北林学院学报 2014，30(5)：84~87 JournalofNorthwestForestryUniversity doi：10．3969／j．issn．1001—7461．2014．05．15 带有 GFP标签的油松苯丙氨酸解氨酶基因表达载体的构建 李 薇 ，徐 华 ，樊军锋 (1．西北农林科技大学 林学院，陕西 杨陵 712100；2．陕西省林业厅 种苗工作站 ，陕西 西安 710082) 摘 要：利用基因重组技术，将油松的苯丙氨酸解氨酶基 因(TaPAL)克隆到 PBI121植物表达载体 中，并且用报告基 因GFP替换 了GUS，构建 了包含绿色荧光蛋白(GFP)基 因的植物重组表达载体 PBII21一GFP—TaPAL，GFP标签比GUS基 因更加 易于检测，方便进行 TaPAL功能鉴定方面的研 究。利用电击法将重组表达载体成功的转化进农杆菌GV3301中。该研 究可以为深入研究苯丙氨 酸解氨酶的结构及功能及进一步通过导入次生代谢关键酶来提高植物的抗病育种提供基础 。 关键词：苯丙氨酸解氨酶基 因；植物表达栽体 ；基 因重组；农杆茵；绿色荧光蛋 白 中图分类号 ：$791．254 文献标志码 ：A 文章编号：1001—7461(2014)05—0084—04 ConstructionofGFP TaggedPhenylalanineAmmonialyaseGene ofPinustabulaeformisExpressionVector LIWei，XUHua ，FANJun—feng (1．CollegeofForestry，NorthwestA FUniversity，Yangling，Shaanxi712100，China； 2．TreeandSeedWorkstationofDepartmentofForestofShaanxiProvince，Xian，Shaanxi710082，China) Abstract：Theresearchaim ofthisstudywastotransferthePhenylalaninammonialyaseofPinustabulae— formisintoplantsexpressionvectorPBI121byusingthegenerecombinationtechnology，andbyreplacing reportgeneGUS with GFP． W e constructed therecombinantexpression plasmidPBll21一GFP—TaPAL whichcontainedthegreenfluorescentproteingene．ComparedtoGUSgeneGFP labelswaseasiertodetect andidentifytheTaPAL function．Byusingtheelectricshockmethodwetransformedtherecombinatedex— pressionvectorintoagrobacterium GV3301．Theresearchprovidedthebasisforfurtherstudyofthestruc— tureandfunctionofphenylalanineammonialyaseandbyimportingthekeysecondarymetabolism enzymes toimprovetheplantdiseaseresistance． Keywords：phenylalaninammonialyase；plantexpressionvector；generecombinationtechnology；agrobac— terium ：GFP 油松栽培广 ，适应性强 ，在 中国北方大面积栽 在受到低温 、机械损伤 、病虫害侵染时均会诱导 培 ，有 良好的保护水土及美化环境的功能 。苯丙氨 PAL基因的表达 j。 酸解氨酶 (Phenylalanineammonia—lyase，PAL)是