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《生物电镜技术》学习指导
基础知识
1、世界上第一台透射电镜发明于1931年。
2、人眼观察物体的能力是由视角、亮度、反差等视觉要素所决定的。
3、正常人眼在明视距离250㎜的分辨率是0.2㎜。
4、电子透镜可分为静电电子透镜和磁电子透镜。现代电镜中只有在电子枪中应用的静电电子透镜是由阳极、栅极和阴极组成。
5、电磁透镜的像差有几何相差、像散、色差和衍射差。
6、电子与固体样品发生作用时,可产生的各种信息有透射电子、二次电子、俄歇电子、X射线、 背散射电子、吸收电流。
7、透射电镜的基本组成可分为电子光学部分、真空排气部分和电气部分三大部分。
8、生物样品的反差主要是由物质的质量厚度决定的。
9、判断电镜图像焦是否精确常采用图像摇摆法和费涅尔条纹法。当放大倍数小于5万倍时用图像摇摆法,大于5万倍时用费涅尔条纹法。
10、扫描电镜的特点是图像景深大、立体感强和样品的适应性强。
11、扫描电镜主要是由电子光学系统、信号检测及显示系统、真空系统和电源系统组成。
12、扫描电镜观察用显像管是长余辉的,而摄影管是短余辉的。
13、常用的支持膜有Formvar 膜、火棉胶膜、帕罗丁膜和碳膜。
14、微筛的制作方法有哈气法、甘油法和气压法。
15、常用的固定方法有单固定法、双固定法、原位固定法和灌流固定法。
16、常用的脱水剂有乙醇、丙酮等。
17、常用的负染色方法有滴染法、漂浮法和喷雾法。
18、扫描电镜生物样品干燥方法有自然干燥法、真空干燥法、冷冻干燥法和临界点干燥法。
19、覆盖于载网之上的一层电子透明的薄膜称为支持膜。
20、常用的固定剂有醛类、四氧化锇和高锰酸钾。
21、扫描电镜生物样品制备的主要步骤有清洗与固定、脱水与干燥和增强导电性。
22、用来置换脱水剂而后又被干燥剂所置换的液体物质称为中间剂。
名词解释
1、视角:由物体两端通过眼的光学中心的联线所成的角。
2、极靴:在包壳透镜空心处加装的一对导磁率极高的铁钴金制件。
3、像差:指实际光学系统和理想光学系统成像的差别。
4、场深:电镜的场深是指透镜物方轴上的一段距离,在此距离内,当调节物镜电流改变焦点时,图像始终清晰。
5、焦深:在透镜的像方存在着的一个与场深等效的轴间距离,在这段距离上,假定物的位置保持不变,只移动像,像一直是清晰的。
6、二次电子:样品原子的核外电子受入射电子激发后,逸出样品表面时的电子。
7、倾斜角效应:当入射电子束强度一定时,二次电子信号的强度随样品倾斜角增大而增加。
8、边缘效应:在样品边缘和尖端部位二次电子极易脱离样品,产生较多的二次电子,图像异常明亮。
9、像素:指构成扫描电镜图像的许多明暗相间的小点,即构成图像的基本单元。
10、支持膜:指覆盖于载网上的一层电子透明的薄膜。
11、载网:在透射电镜技术中使用的一种圆片状极细的网状材料。
12、取材:从动植物有机体上或从培养物中取得所需材料的操作。
13、固定:用化学或物理的方法迅速杀死细胞的过程。
14、脱水:指用适当的有机溶剂取代组织细胞中的游离态的水。
15、负染色技术:又称为阴性反差染色技术,是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外围的电子密度,使样品显示负的反差,衬托出样品的形态和大小。
16、有效放大:人眼的分辨率与显微镜的分辨率的比值。
17、电子透镜:指轴旋转对称的电场或磁场,对带电粒子有聚焦作用。
18、质量厚度:即样品的质量与厚度的乘积。
19、电子探针:指扫描电镜中用于在样品表面做光栅状扫描的极细的电子束。
三、问答题
1、生物样品取材的基本原则和要求。
生物材料在离开机体或正常的生长环境之后,其组织结构往往在自溶酶的作用下,迅速发生各种死后变化,为尽可能保持生物材料生活状态时的结构,取材操作应遵循以下原则和要求:①准确:应根据研究目的与要求,准确定位而后取材,取得的材料要具有代表性。②迅速:取材速度要快,动物材料体后须在1分钟或更短的时间内立即投入固定液中,以减少自溶作用的影响。③体积小:固定剂的适能力较弱,(O3O4为0.25㎜,或戊二醛为0.5㎜)为保证固定剂能浸入到材料的各个部位,一般要求样品体积的大小不超过1㎜3或截面为1㎜2的长条。④低温:生物材料离体后,组织细胞中的各种酶尤其是溶酶体中的水解酶将释放到组织中,使构成组织结构的主要成分如蛋白质、核酸等迅速降解,造成自溶。为降低酶的活性,要求在0-4℃的低温条件取材,所用的容器及器械等应预先冷却。⑤防损伤:取材器械要锋利,动作要轻巧,防止牵拉、挤压,造成组织细胞内部结构的损伤破坏。
2、透射电镜制样中的双固定法及其原理。
双固定法即戊二醛—锇酸双固定法,先用戊二醛前固定,再用锇酸后固定。戊二醛毒性不大,有两个醛基,对细胞的结构有很高的亲和力,能稳定糖元,保存核酸、核蛋白,尤其对微管、内质网等细胞膜系统和细胞质有
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