FISH技术在检测乳腺癌HER-2基因扩增中应用.pdfVIP

2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 59．FISH技术在检测乳腺癌HER-2基因扩增中的应用 王颖 北京大学第一医院病理科 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。近年来，随着手术、放化疗及靶向治疗等多种治 疗手段的不断发展，乳腺癌致死率明显下降。研究显示18％～20％的乳腺癌病例，人类表 皮生长因子受体2(Human Gm、讹Factor 2，HER．2)阳性表达。 Epidermal Receptor-type HER．2阳性患者预后差、激素治疗和常规化疗反应差，但却是靶向治疗(Herceptin和 lapatinib)的理想人群。因此准确地检测HER．2状态是乳腺癌有效治疗的前提。 HER．2的单克隆抗体和小分子抑制剂。美国临床肿瘤学会／美国病理医师学会推荐的HER．2 insitu FISH)法。免疫组化强阳性(3+)者，直接可进入靶向治疗；免疫组化阴性 hybridization， 或弱阳性(1+)者，不推荐行靶向治疗。免疫组化阳性者(2+)，进一步行FISH检测，存 在基因扩增可接受靶向治疗，无扩增不推荐靶向治疗。目前研究资料表明靶向治疗效果与 FISH检测结果的相关性较免疫组化检测结果的相关性更高。 目前，在我院乳腺中心治疗的乳腺癌患者如考虑进行靶向药物的治疗，由临床提出申请， FISH 患者同意的情况下，采用FISH技术检测HER．2基因的扩增。2009年lO月开始HER一2 检测，我们共检测14l倒(免疫组化2+)。FISH的阳性率一直稳定在15．4％左右。 一、建立HER2扩增检测 1．建立内部验证措施探讨：ASCO／CAP指南指出，FISH检测结果存在实验室间的差 异和不一致性，因此建议最佳内部验证程序： (1)实验室内新技术正式应用前必须进行验 证：(2)首次试验验证建议选用25一100个样本，可通过相同实验室不同检测方法或不同实 验室相同方法进行； (3)阴性和阳性病例符合率需达到95％以上。我院在建立FISH检测技 术初期采用IHC和显色原位杂交(CIsH)两种方法验证，FISH与IHC结果符合率分别为阴性 病例100％，阳性病例则14例中l例阴性，与CISH结果符合率阳性和阴性均为100％。对符合 率不达标的数据有待增加验证病例后进一步分析。 2．解决HER2遗传异质性问题：HER2遗传异质性指扩增标本中仅5％一50％的肿瘤细胞 表现扩增。为保证检测的准确性，我们采取了以下措施以克服HER2遗传异质性：(I)对照 HE和IHC染色片定位选择代表性区域；(2)判读FISH结果时全面观察整张切片；(3)选 择2—4个有代表性的部位，至少计数20个细胞：(4)报告注明扩增强度和分布情况、浸润 性肿瘤存在HER2扩增的比例、细胞内阳性信号的分布(点状／簇状)及扩增细胞的分布情 况(散在／聚集)。 二、影响FISH技术染色质量的因素 与其他技术相比，FISH技术敏感度和特异性高，易于定量检测，不容易受组织样本和 观察者主观因素的影响。但是如果在实验过程中操作不当，会严重影响染色结果： l、标本处理及固定时间：标本处理和固定时间不恰当可造成重要抗原的抗原性减弱或 丢失，甚至组织自溶，各项病理评估指标不准确，导致无可挽救的损失。ASCO／CAP指南 的最佳标本处理和固定规范要求包括：离体标本及时处理，切开固定于4％中性缓冲甲醛液 中，固定时间严格控制在6．-48h内。 2、标本的制片过程：制片标准化过程中的每个环节都会影响到FISH实验的结果。如烤 片时间过高、切片太厚、玻片不净、脱蜡不充分等都会影响到信号的观察和判读。 119 2011年全国病a技术新进展研讨会论文汇编 3、蛋白酶K的消化t这一步骤可以说是FISH实验成败的关键，也是提高杂交率和诊断 准确率的前提。实验中90C水浴和蛋白酶K处理是对组织细胞进行部分的消化酶解，以去除 棱酸表面的蛋白质，增强组织的通遗性和核酸探针的穿透性。