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肽核酸探针在微生物诊断领域中的应用 魏巍 澳斯邦生物工程有限公司业务研发中心，山东烟台，264006 Nucleic 摘要肽核酸(PeptideAcid，PNA)是DNA的模拟物，生物稳定性极高，与核酸 分子具有高度亲和性和特异性识别力。利用微生物rRNA高保守性可作为微生物分类的特 点，将微生物种属特异性rRNA序列作为肽核酸探针的结合靶标，已经成功的用于细菌、真菌 及寄生虫的快速诊断。本文就肽核酸的性质及其在微生物诊断领域的应用作一系统综述。 关键词肽核酸；微生物诊断；核糖体RNA NueleicAcid，PNA)是1991年 肽核酸(Peptide 由丹麦科学家NielsenE嵋等设计的以中性酰胺键为 骨架的DNA类似物，其骨架结构单元为(2一氨乙 基)甘氨酸，碱基部分通过亚甲基羰基与主骨架氨基 连接，可以与DNA特异性结合。其骨架为电中性， 与DNA—DNA或RNA—DNA相比不存在静电排斥 作用，因此具有很高的核酸亲和性及热稳定性。目 前，PNA已应用于科研和微生物诊断领域，例如，基 因点突变的分析、染色体分析、人体病理学、病毒、真 菌[引、细菌[3]等。目前根据不同微生物的特点和诊 Pr●I●●■ 断方法的要求进行微生物快速诊断主要有三种策 图1 蛋自、肽核酸及DNA的化学结构示薏图 略：1)分离培养后快速鉴定；2)短时间富集后检测； 比较PNA与DNA的结构发现，两者除了碱基 3)直接检测。针对rRNA的PNA探针已经成功运 外没有其他共同的功能基团，因此，两者的理化性质 用于以上三种方式，而且能够提供了更快速准确的 存在很大差异。PNA在酸性环境中相对稳定，而 结果，并在此基础上发展出多种检测模式，如基于玻 DNA用强酸处理可引起脱嘌呤。PNA氨基端的游 片的荧光原位杂交，基于滤膜的荧光原位杂交、化学 离氨基是不稳定的，特别是在碱性条件下，通过环闭 发光原位杂交、液相杂交、Q—PNAPCR等。随着以 合可发生N一酰化转移或氨基端的切割[4]。PNA为 rRNA多态性为基础的微生物分类学的发展，两者 电中性，与DNA相比水溶性较差，其溶解度与片段 结合正在共同推进微牛物诊断技术的快速发展。 长度和嘌呤嘧啶含量有关[5|。通过修饰(如嵌入带 1．PNA结构及性质 正电荷的赖氨酸残基)可以改变其溶解度，增强 1．1PNA的结构 PNA—DNA嵌合体的水溶性。在PNA末端连上溶 PNA在形态和空间结构上与DNA十分相似， 解度增强剂(E—linkers)也可增加其溶解度且不影响 两者都是由携带4种碱基的单体相连形成，这就保 证PNA能够依靠碱基互补配对原则识别相应的序 多数PNA探针及其应用都是很理想的，但Perry- 列，这也是利用PNA进行诊断的基础。PNA与 O DNA的最大不同在于，DNA是由磷酸二酯键连接 ers可降低PNA的穿膜能力。目前PNA寡聚物浓 形成的磷酸戊糖骨架；而PNA则是由酰胺键连接