NDV反向遗传进展.pdfVIP

2．3．4改善牛内县震 饲料中添力1800mg／kg糖萜素，牛柳、西冷和臀肉等优质肉比例增多，大理石条纹花 纹提高一个等级。 在养殖业中糖萜素能替代抗生素饲料添加剂，是一种新型、安全、无公害的绿色饲 料添翔荆，对生产安全、优质的动物源性食菇帮保护人类健壤其有重要意义。 63．corn 畜牧专业，电子邮箱：hztangfian@1 NDV反向遗传进展 姜延龙1’2刘怀然刘培欣孔宪刚1 (1中国农业科学院哈尔滨兽黪研究所禽传染病研究室哈尔滨150001) (2东l艺农韭大学动物医学院哈尔滨150030) 薪城疫(NDV)是一种对养禽业造成巨大损失的、由来以久的传染病，虽然其研究 历史较长，研究范围较广，但仍有许多亟待解决的问题。反向遗传操作已经成为研究病 毒功麓、开发新型疫苗的一种不可或缺的技术平台，融1994年盼病毒成功拯救以来，负 链RNA病毒的拯救研究已取得了广泛成功，对NDV而言，已成功拯救的NDV病毒包括La sota、Clone 30、zJ圭、BeaudetteC等。反向遗传系统的建立，为瘸毒基因功能研究 及疫苗研制建立了良好的技术平台。 病毒的毒力是疫苗生产及疫病控制最关心的闻题，NDV的毒力受多种因素影响，包 括F蛋白、tIN蛋白及P蛋白等。通过定点突变及替换研究了这三种蛋白对病毒毒力的影响， 发现F蛋自内部的眄裂解位点是决定NDV毒力的一个重要因素，联蛋自的球状头部及颈部 对病毒毒力均有影响作用，且HN蛋白的构象对病毒毒力影响很大；而病毒的组织嗜性与 瘸毒的嚣嚣蛋自有关，糖基化位点的缺失对礤与宿主细胞的识别没有影响。NDV通过在保 基因的mRNA编码P、V(一位移码突变)、谨(鼹位移码突变)三种蛋自。￥蛋自在病毒的毒力 sota株及BeaudetteC株隽骨架，首次利用定点突变、替换技术研究了HN、F及P基因对 致病性的协同作用，表明三种基因对致病性均有不同程度的影响，验证了病毒的毒力是 由多种因素共同调控的。 反向遗传技术使NDV疫苗的研发有了更大的发展空间，构建毒力基因缺失疫苗或透 过基因改造而获得更加稳定、毒力降低的疫苗株。NDV做为疫苗载体具有诱人的优势， 茸前反向操作在NDV中应蠲最多的也集中于此，朗将外源抗原蛋白插入到鞠V全长cDNA 克隆中，使拯救的嵌合病毒同时表达一种或几种目的抗原蛋白，达到～次免疫产生多种 抗体的效栗。鉴于世界范匿内的禽流感大规模爆发，近期NDV活载体疫苗的研究多集中 在构建同时表达NDV和AIV抗原蛋白的重组病毒，jtlVeits 和F基因闻插入离致病性禽流感病毒株A／c魏主eke珏／薹t毪王y／8／98H5N2)的疆矗基因片段，在 NDV囊膜表面稳定表达了HA蛋白并可稳定传代10代以上，免疫接种后可产生针对NDV和 Z以h hIV静特异性抗体并可保护税体耐受致死量NDV和hIV强毒的攻击；此外，Huang 克隆的3’一末端，并得到了高水平表达。重组病毒免疫后可抵抗NDV及IBDV的阎时攻击， 且保护率在90％以上；加强免疫后几乎可完全保护两种病毒的攻击。已经表达的外源抗 原还包括人(猴)免疫缺陷病毒H(S)IVGag蛋白、呼吸道合胞病毒RSVF蛋白等。 长链eDNA中插入外源抗原基因的大小受限制，且随着插入片断长度的增加，拯救效 率明显下降。为了克服长链eDNA的限制，Qinshan 独立的片断，这样两段独立的短片断可容纳外源基因的长度较未分段eDNA增加了30—35％， 在拯救病毒中成功表达了200kDa的SARS病毒S蛋自。 性，可定向介导肿瘤的治疗，PtlhlerF将表达针对肿瘤组织的特异性IgG的重链和轻链 蛋白基因分别插入病毒基因组，可使拯救的病毒表达完整的IgG分子，在肿瘤治疗的临 床应用上前景诱入；JankeM在拯救的NDV病毒中表达了自细胞集落刺激因子(GM—CSF)， 体外实验中以该病毒进行免疫可刺激外周皿单核细胞发挥抗肿瘤效应，并产生高水平的 IFN—a。 做为目前已普遍应用的一种技术手段，反向遗传操作已经在病毒基因功能研究、疫 苗研制等方面取得了可喜成绩，今后应更有效的利用这项技术为畜禽疫病防治做出更大 的贡献。 通讯作者，研究受，研究方向：动物病毒分子擞物学。