基于T7 RNA聚合酶的传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立.pdfVIP

浙江大学学报 (农业与生命科学版) 34(6)：602～607，2008 JournalofZhejiangUniversity(Agrie． LifeSci．) 文章编号 ：1008—9209(2008 DOI：10．3785／j．issn．1008—9209．2008．06．003 基于T7RNA聚合酶的传染性法 氏囊病病毒反 向遗传系统的建立 魏永伟 ，章晓栋 ，侯贤宏 ，徐 弘，于 涟 (浙江大学 动物科学学 院 浙江省动物预防医学重点实验室 ，浙江 杭州 310029) 摘 要 ：为 了建立传染性法 氏囊病病毒反 向遗传系统，应用 PCR法在鸡传染性法氏囊病病毒基 因组 A、B两节段 的 5’末端和3’末端分别引入 T7启动子和核酶 HDV序列 ，然后分别将含有T7启动子和核 酶 HDV序列的A、B节段构建到载体 PT—Pluc当中，构建感染性载体 PTmA和 PT—mB．在脂质体介导 下将 PT—mA和PT—mB共转染经痘病毒 vTF7—3(含 T7RNA聚合酶基因，能稳定表达 T7RNA聚合 酶)预先感染 1h的vero细胞 ．细胞病 变观测 、间接 免疫荧光试验 、电镜观察和分子标记检测证 实成功实 现 了鸡传染性法氏囊病病毒的遗传拯救 ． 关 键 词 ：IBDV；反向遗传 ；T7RNA聚合酶 中图分类号 ：$858．3l；Q78 文献标识码 ：A WEIYong-wei，ZHANG Xiao—dong．HOU Xian-hong XU Hong，YU Lian(ZhoiangProvinceKeyLabof PreventiveVeterinaryMedicine，CollegeofAnimalSciences．Zhejiang University。Hangzhou310029 China) Establishmentofinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)reversegeneticssystem usingT7RNA polymerase． JournalofZhejiangUniversity(Agric．＆ LifeSci．)，2008，34(6)：602—607 Abstract：InordertOestablishthereversegeneticsofIBDV，thesequencesofT7promoterandribozymeHDV wereintroducedinto the5’and 3’terminalsofsegmentsA and B ofIBDV genomeusing PCR．Then the segments，which containing promoterandribozymeHDV sequences．werecloned intoPT-Plucvectorand namedasPT mA andPT mB，respectively．BothPT-mA andPT-mBwereco-transfectedintovetoceilswhich wereinfectedbyrecombinantvacciniavirusvTF7～3(vTF7—3canexpresstheT7RNA polymeraseinverocel1) for1hour．Thesurveyingofcytopathiceffect(CPE)，indirectimmunofluorescencetestandmolecularmarker detectionconfirmedthesucceedingoftherescuingofIBDV． Keywords：IBDV ；reversegenetics；T7RNA polymerase 鸡传染性法氏囊病病毒 (infectiousbursal 3．3kb，含两 个 阅读框 ORF1和 ORF2E33． diseasevirus，IBDV)属于双 RNA 病毒科 ，禽 ORF2编码一