成纤维细胞生长因子(FGF-2)和信号转导转录活化因子(STAT-3)在小鼠急性胰腺炎中的表达.pdfVIP

2007，国际普通外科论坛暨第十四届全国普外基础与临床进展学术交流大会 、成纤维细胞生长因子(FGF一2)和信号转导转录活化因子 V(STAT一3)在小鼠急性胰腺炎中的表达 河南大学淮河医院外六科(开封475001) 王顺昌 陈纪伟 梁 冲 急性胰腺炎是一种常见的急腹症，它起病急，变 2／lOOg体重)，共2次，每次间隔1h，诱导急性胰腺 化快，病情严重程度差异悬殊。临床上将其分为轻 炎模型。正常组在相同时刻点注射生理盐水。分别 h、16h、24 型急性胰腺炎和重症急性胰腺炎。病理上分为以胰 在8 h及48h处死小鼠，取胰腺组织，制 腺水肿为特征的水肿性胰腺炎，以明显的胰腺和 作标本，进行病理观察，并用免疫组化法测定FGF一2 (或)胰周坏死为特征的出血坏死性胰腺炎。急性胰 和STAT-3在胰腺组织中的表达。 腺炎病因学与病理生理学机理尚不完全明了。FGF 1．2．2免疫组化步骤及结果判定免疫组化染色 最早是从牛垂体中分离纯化的一种多肽，最近几年 标本切片制作由武汉大学医学院病理教研室制作， 免疫组化染色步骤严格按照试剂盒说明进行。石蜡 研究认为FGF-2是通过一种ATP驱动的多肽泵转 运的促生长因子。已有研究表明它在血管形成中有 切片，常规脱蜡至水。PBS(磷酸盐缓冲液)冲洗后， 3％双氧水作用20min，以阻断内源性过氧化物酶 促进作用。但是FGF-2在急性胰腺炎发病过程中 min， 活性。PBS冲洗加5％正常山羊血清封闭15 的作用尚未阐明。STAT-3被证明是巨噬细胞中抗 炎症信号的最重要的中间体，在细胞因子诱导的细 胞特异性应答反应中起着关键作用。Ward研究发℃过夜，37℃复温20min，PBS冲洗后加生物素化 现急性肺损伤后STAT3作为炎症细胞因子的中间二抗，37℃作用20 体被激活。如果扰乱“细胞因子／JAK激酶／胞内特 物，37℃作用20 定蛋白质的磷酸化”这一通路中的任一种产物，调节 色，苏木素复染，脱水、透明、封片。应用PBS代替 炎症反应的功能就会丧失，炎症反应强度就不断扩 一抗作阴性对照。 大，最终导致组织严重损伤。在本实验中，用免疫组 免疫组化结果判定：免疫组化结果判定以细胞 化方法考察胰腺炎小鼠胰腺组织中FGF一2和质内呈棕黄或棕褐色着色为阳性细胞，每一个标本 STAT一3的表达，对FGF-2和STAT一3在急性胰腺分别观察胰腺腺泡细胞、导管上皮细胞、胰岛细胞及 炎发病机理中的作用作一探讨。 间质细胞。依照染色强度兼顾阳性细胞的百分比给 以分级，阴性(无染色)=0分，弱阳性(微染色)一1 1材料与方法 分，阳性(染色)一2分，强阳性(强染色)=3分。阳 1．1动物及主要试剂 性细胞数5％为表达阴性，阳性细胞数≥5％为表 健康昆明小鼠50只，体重15～20g。L-精氨 达阳性。 酸分析纯级产品(上海华美生物工程公司)，使用时 1．2．3免疫组化图像分析各组切片均采用生物 用0．9％生理盐水配制成20％的L一精氨酸溶液，医学图像分析系统对免疫组化染色阳性反应产物进 FGp2(147)：sc-79多克隆抗体及SABC试剂盒(美行半定量分析。其具体操作为：取切片在光学显微 国HyClone—PIERCE公司)，戊巴比妥钠，Bio-Rad镜下以相同倍数(20×10)随机选用5～10个视野取 Model AE