淡水藻类叶绿素测试方法比较研究.pdfVIP

2004年水协净水专业委员会年会论文集 淡水藻类叶绿素测试方法比较研究t 丛海兵1黄廷林1周真明1何文杰2 (1．西安建筑科技大学环境与市政工程学院， 2．天津自来水集团有限公司) 摘要：通过实验，对几种分光光度法测定淡水藻类叶绿素的方法进行了对比研究。 研究表明，笔者在生产中探索采用的方法(醋酸纤维膜过滤、90％醇提取) 基本与美国标准方法(玻璃纤维膜过滤、90％丙酮提取)等效，重现性好。 而国内推荐使用的方法(醋酸纤维膜过滤、90％丙酮提取)测试结果偏低， 重现性较差，有待改进，并提出了改进措施．另外，对玻璃纤维膜过滤加 90％乙醇提取的组合方式进行了对比研究，结果也存在偏差。 关键词：叶绿素分光光度法玻璃纤维膜醋酸纤维膜丙酮乙醇 水体富营养化、藻类大量繁殖导致水质恶化是供水行业近年来面临的一大问题。 反映藻类多寡的指标有藻类计数、叶绿素等。藻类计数法是用显微镜观测水体中藻 类的个数，数据简单直观。但不同藻种个体大小悬殊，用个体数并不能准确反映藻 类生物量的多少； 由于藻类计数的工作强度大，不同的测试人员对藻类的鉴别存在 差异，计数结果有较大误差。藻类含有的色素体包括叶绿素(chlorophyll)、叶黄素、 体干重的1-2％，部分藻类还含有叶绿素b、c。叶绿素a占叶绿素的绝大部分，是 整个光合作用过程中的能量传递中心。因此，用叶绿素、尤其是叶绿素a能比较准 确地反映藻类生物量。 l 叶绿素测试方法简介 有三种方法测定藻类叶绿素，即分光光度法、荧光法、高效液相色谱法。 1．1分光光度法测定叶绿素a、b、c 分光光度法是目前最常用的叶绿素测试方法，但目前我国还没有该方法的国家 标准，不同机构或组织推荐使用的方法略有差别【12,5】。各方法的基本步骤是：(1)抽 滤。用微孔滤膜、全玻真空抽虑装置、真空泵过滤含有藻类的水样，将藻类截留在 微孔滤膜上。(2)色素提取。将截留了藻类的滤膜用提取液(90％丙酮)浸泡研磨， 将叶绿素提取到提取液中，将提取液倒入离心管中，定容到数毫升。(3)离心分离。 基金项目：国家高技术研究发展计划(863)项目(2002AA601140) 341 2004年水协净水专业委员会年会论文集 用离心机离心装有提取液的离心管，使滤膜纸屑沉淀到离心管底，获得澄清的萃取 液。(4)测定。将澄清的萃取液倒入比色皿中，用提取液作参比，在分光光度计上 根据测得的各波长处的吸光度、水样体积、萃取液体积，计算得到水样中叶绿素a、 b、c的浓度。此类方法称为三色分光光度法。 在水环境中还存在叶绿素降解产物，能干扰叶绿素的测定。降解产物有叶绿素 酸脂、脱镁叶绿酸、脱镁叶绿素，脱镁叶绿素a和脱镁叶绿酸能干扰叶绿素a的测 定，因为它们与叶绿素a具有相同的吸收光谱。为了避免降解产物对叶绿素a测定 的干扰，可采用单色分光光度法。其方法是在上述三色法测定后的比色皿中加入2 光度值对叶绿素a进行修正，得到不含降解产物的纯叶绿素a浓度。 1．2荧光法测定叶绿素a131 分光光度法的测定极限为lug／L，如果水样中叶绿素含量极低(如贫营养型水 体)，则要用荧光法测定，它的灵敏度至少比分光光度法提高10倍，而且需要样品 少。 的叶绿素a试剂配制浓度为O．2、2、5、20、200ug／L的标准溶液，并用分光光度法 测定其准确浓度。在每一灵敏度位置测定各标准溶液的荧光读数，导出荧光计读数 与叶绿素a浓度间的换算系数。 Fs=C。／Rs (1) 式中R——在设定灵敏度位置S的换算系数： R厂在设定灵敏度位置S的荧光计读数； Cam被测标样的叶绿素a浓度(ug／L)。 (6)计算。用下式计算 (5)N定。在设定灵敏度位置测定萃取液的荧光计读数。 萃取液叶绿素a浓度： CE=RbFs (2) 水样的叶绿素a浓度