小麦赤霉菌β-微管蛋白的原核表达及其分离纯化.pdfVIP

小麦赤霉菌13·微管蛋白的原核表达 及其分离纯化 张聪+ 徐建强周立邦陈长军周明国” (南京农业大学植物保护学院，江苏南京210095) 摘要：小麦赤霉病(WheatScab)是中国长江中下游冬麦区和东北春麦区发生的重要病害。 其病原菌的无性态为禾谷镰孢菌(FusariumgraminearumSchw)，有性态为玉蜀黍赤霉[Gib- berella 明抗性菌株比例呈上升趋势。近年来对许多病原真菌的抗性检测发现B一微管蛋白基因的点 突变，导致蛋白的三维构象发生改变，能阻止药剂与靶标结合，导致抗药性的产生，但周明 国等人的研究发现，从禾谷镰孢菌(Gibberella 丝状真菌一样由13一微管蛋白198位氨基酸突变所致。而是与一种未命名微管蛋白有关，该 基因与其他常见真菌尽微管蛋白基因氨基酸序列同源性70％～78％。本研究旨在将该病原 菌B．微管蛋白原核表达，分离和纯化，为进行离体药剂与靶标蛋白结合试验，制备靶标蛋 白的单克隆抗体奠定基础。 HP Columns进行纯 4h后，得到了N末端融合了6×His纯化标签的表达产物，用HisTrapTM 化，纯化的蛋白经SDS—PAGE电泳进行纯度分析。结果显示，诱导后的在大肠杆菌中表达 了分子量约68kD左右的蛋白，和预测的目标蛋白大小一致，表达的产物主要以包涵体的形 式存在，表达量依次占细菌总蛋白量的88．7％、75．2％、41．8％和77．3％。纯化后显示， 各蛋白的纯度均达到90％以上。原核细胞表达系统具有成本低、周期短、操作简便等许多 优点，本试验构建了表达13微管蛋白和未命名的微管蛋白的高效表达质粒，为下一步实验 需求打下了基础。 关键词：微管蛋白；融合表达；纯化 ·作者介绍：张聪(1984一)，女，山东东营人，硕士生，从事杀菌剂毒理及抗药性研究； ”通讯作者：周明国(1954一)，男，江苏南通人，博士生导师，主要从事植物病害化学防治研究，E—mail：rag- zhou@njau．edu．cn。 ．108