蕹菜过氧化物酶固定化条件分析及固定化对其理化性质影响.pdfVIP

第 39卷 第 12期 西 南 师 范 大 学 学 报 (自然科学版) 2014年 12月 Vo1．39 No．12 JournalofSouthwestChinaNormalUniversity(NaturalScienceEdition) Dec． 2014 蕹菜过氧化物酶固定化条件分析 及 固定化对其理化性质影响① 王红扬 ， 孙才云 ， 黄 忙 。， 唐云 明 1．西南大学 生命科学学院，重庆 400715；2．重庆市甘薯工程研究中心，重庆 400715； 3．三峡库 区生态环境教育部重点实验室 ，重庆 400715 摘要 ：利用 0．2 聚乙烯醇一海藻酸钠 (PVA—CA)作载体 ，饱和硼酸作交联剂 ，CaC[2作 固定剂 固定蕹菜 POD，通过 单因素试验探究了各个因素对 同定化的影响；再通过正交实验分析 ，发现在饱和硼酸一6 CaC1，固定化时间为 45 min，载体与酶液 比例为 1：2和0．2 PVA一3％CA条件下固定化蕹菜叶POD最佳 ．同定化酶的最适温度 、温度 稳定性均升高，并且重复使用 7次后酶活力还剩余 5o 以上． 关 键 词 ：固定化 ；蕹菜 ；过氧化物酶 ；理化性质 中图分类号 ：Q55 文献标志码 ：A 文章编号 ：1000—5471(2Ol4)12—0058—07 过氧化物酶 (Peroxidase，POD)是一类在生物体 内普遍存在的、由单一肽链和铁卟啉组成的血红蛋 白 类氧化酶 ，催化由H O 参与的氧化反应 ，例如参与胺类和酚类化合物 的氧化反应．POD在生物体内发挥 多种重要功能，例如参与分解吲哚乙酸 、合成木质素 和植物体内防御反应 ]．当今，该酶不仅广泛用 于免疫印迹 ]、酶联反应 和电镜技术 等生物学研究 ，而且在污水处理 ]、生物传感器 等领域发挥重 要作用． 酶在催化过程 中表现出来 的高效性 、专一性以及反应条件温和 ，使其得 到越来越多 的关注．但是另一 方面 ，酶的不稳定性 ，尤其是一次性使用也限制了其催化领域的进一步发展．固定化酶是指将酶与特定载 体相结合，从而将酶固定在载体上的过程．固定化的酶不但非常容易与底物以及产物分开 ，而且提高了酶 的稳定性，可以反复使用．目前虽然已有辣根 、大豆皮 ]、莲藕。¨]、甘薯叶 、菊芋l】。过氧化物酶 固定 化的相关报道，但是，本实验原材料蕹菜 ，又称空心菜 (IpomoeaaquaticaForsk)，不但在我国华南 、华中、 华东和西南各地普遍栽种 ，而且相对于其他植物，可持续收割 ，价格低廉 ，每公顷产高达 75000kg，是生 产廉价 P0D并进行固定化的理想材料．因此对于蕹菜来源的过氧化物酶的固定化进行研究具有很大意义 ， 本实验 以分离纯化得到的蕹菜 POD为材料 ，利用包埋法对其进行固定化 ，采用单因素和正交试验法分析 影响固定化的条件 ，并且对 固定化前后的理化性质进行对比分析． 1 材料和方法 1．1 实验材料 以本实验室分离纯化得到的电泳纯的蕹菜 POD作为实验材料． ① 收稿 日期 ：2014一O5—2O 基金项 目：重庆市科委重点攻关项 目(CSTC，20llAB1027)． 作者简介 ：王红扬 (1987一)，男 ，河南南阳人 ，硕士研究生 ，主要从事蛋 白质与酶工程的研 究 通信作者 ：唐云明，教授． 第 12期 王红扬 ，等 ：蕹菜过氧化物酶固定化条件分析及 固定化对其理化性质影响 59 1．2 主要试剂与仪器 聚乙烯醇 (PVA)，海藻酸钠 (CA)，上海化学试剂公司；CaC1。，加拿大 BIOBASIC公司 ，其余试剂均 为国产分析纯． uV一2550紫外可见分光光度计 ，日本岛津公司；精密电子天平，Mettler—ToledoGroup；Mill—Qplus超 纯水仪 ，Millipore；SevenEasy精密 pH计 ，Mettler—Toledo． 1．3 实验方法 1．3．1 固定化过 氧化物酶 的制备 本实验运用了聚乙烯醇 (PVA)一海藻酸钠 (cA)为载体 ，包埋法 固定蕹菜 POD．海藻酸钠 (cA)反应条 件温和 ，能够与二价 阳离子 Ca ，Ba 等结合后可形成凝胶 ，但是