石油污染地下水中降解菌株的筛选鉴定.pdfVIP

第四届海峡两岸土壤及地下水污染与整治研讨会 石油污染地下水中降解菌株的筛选鉴定 王广才1，都春博，董健楠，田小维 (中国地质大学(北京)水资源与环境学院，北京100083) 由于石油污染物具有组成复杂性、生物难降解性币I较低的生物可利用度等特点，在石油污染物 微生物原位治理中，土著微生物往往难以有效、快速、彻底地降解土壤和地下水中的石油烃。分离 筛选具有高效降解能力的菌株，成为研究微生物降解石油污染物的机理及对污染水体或土壤进行生 物强化修复的基础。本研究对华北平原某炼油厂受污染地下水中的降解菌株进行了富集、筛选、分 离、纯化，以期获得具有高效降解能力的菌株，为后续的研究提供基础。 该石化冶炼厂有儿十年的生产历史，在长期的原油储存、炼制过程中，大量的原油及其加工产 物、副产物泄漏到厂区及周边的土壤和地下水中，造成了严重的环境污染。为研究泄漏石油在厂区 及周边环境的污染状况以及迁移转化规律，研究组施工了8眼贯穿包气带的钻孔，分别对不同深度的 土层和地下水中有机污染物进行了监测。本研究选取有机污染较重的SH3—4号地下水样品为降解菌 株的来源。取10 1．5 1．5 1 ml水样接种到100ml富集培养基中(NaN03 g， g，(NH4)2S04g，K211P04 0．5 0．5 0．01 0．002 000 mi，原油5 7．0)， MgS04·7H20g，KClg，FeS04．7H20g，CaCi2g，蒸馏水l g，pH 30℃，160 rpm振荡培养。培养一周后，按10％的比例接入新鲜的以原油为唯一碳源的培养基中，相 同条件下进行第二次富集培养。连续转接5次后，州接种环挑取富集培养液，在原油培养基平板上划 线分离，将平板置于30℃培养箱内培养观察。待降解菌株长出后，选取不同形态的单菌落，进一步 在原油固体培养基上划线纯化，连续3次。 经过长期的富集培养和反复的分离纯化，共得至．fJ4株可以以原油为唯一的碳源和能源生长的细 菌。分别提取这几株菌的基因组DNA，选取通用引物PCR扩增其16SrDNA，产物送去测序。将所得 序列输入Genbank，用Blast程序与数据库中已有序列进行比对分析。根据与数据库中序列的同源性， 物，已有研究表明该属微生物能够降解苯、氯苯、苯胺和聚乙烯醇等难降解有机污染物11,2】。Anne 等人发现红球菌在英国苯污染地下水降解菌群中占主导地位p】。所以，该类微生物在地下水污染的 1972年新建的一类厚壁菌，革兰氏染色反应阳性，菌体不规则杆状，老龄培养物呈球状且失去革兰 氏染色阳性反应。据我们所知，目前还没有短杆菌属微生物降解原油的报道。将菌株BXJ鉴定为 Stenotrophomonas属微生物。冈为该属微生物多为致病菌，所以我们不对其进行进一步的研究。 本研究得到的4株细菌，其中的三株均具有良好的降解性能。微生物降解石油能力的高低与接种 量的大小、原油组成成分和浓度的高低等均有一定的关系，在自然环境中的降解能力还会受到其他 微生物及环境囚素的影响。本课题组筛选得到的3株细菌具有很好的应用潜力，今后将进一步研究其 培养条件及发酵培养基的优化，从而获得高活性的细菌发酵液，以提高其在自然环境下与土著微生 物的竞争力。同时考察影响细菌降解原油能力的生物和非生物冈素、以及细菌混合复配的降解效果， 以期为实际应用到石油污染区域的生物修复提供一定的研究基础。 参考文献 【2】沈锡辉，刘志培，土保军．刘双江．苯酚降解菌红球菌PNAN5菌株(RhodococcusPNAN5)的分离鉴定、 sp．StI面n 降解特性及其开环双加氧酶性质研究明．环境科学学报，2004，24(3)：482--486． Anne N．Timmis＆An