新的白血病相关抗原CML28%2fExosome的功能研究.pdfVIP

O】3 新的白血病相关抗原CML28／Exosome的功能研究 1南方医科大学南方医院血液科2华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科 周红升孟凡义1张东华2刘文励2 目的：研究新的肿瘤相关抗原CML28在白 血病细胞系及原代白血病细胞中表达；构建负载 扰效率；对照比较干扰SOCSl表达前后，CFSE CML28肿瘤抗原的DC免疫应答疫苗，诱导特异—MLR中DC对于同种反应淋巴细胞的刺激增殖 能力以及效应细胞毒淋巴细胞对于靶细胞杀伤效 性针对CML28抗原的细胞免疫应答；靶向沉默 应的影响，评价沉默SOCSI基因对于CML28DC SOCSI基因在DC(DC)中的表达，增强CML28 疫苗的增敏效应。 DC疫苗的免疫应答功能；靶向沉默CML28／hR— rp46p在人慢性髓系白血病细胞系K562细胞中的 靶序列，经BLAST分析后，设计相应发卡结构及 表达，研究CML28基因表达与K562细胞凋亡与 Bbs I粘性末端，采用DNA连接酶将退火聚合后 增殖的关系，探讨hRrp46p／exosome在K562细胞 中的生物学功能。 方法：1．采用Trizol一步法抽提白血病细胞 评价3个干扰载体对于CML28的基因沉默效率； 系以及原代白血病细胞总RNA，反转录成eDNA， Premier 利用Primer 5．0设计针对CML28的PCR 达后K562细胞的增殖变化情况；Annexin—V／PI 弓l物CML28—5P(5’一GGTAAACGCTAAGCCACG 一3’)CML28—3P(5’一GAAGGAAGCAGAGC- l(562细胞凋亡的影响。 CATCT一33，采用RT—PCR检测、研究CM【28 mRNA在自血病细胞的表达。 结果：1．CML28mRNA在白血病细胞系以及 原代白血病细胞中有不同程度的表达，在AML。 2．设计针对CML28基因的特异性克隆引物， CML—AP和CML—BP细胞中呈高水平表达，在 采用RT—PCR从I(562细胞中扩增出CML28的 cDNA全长；将PCR产物定向克隆至pcDNA3．1ALL和CML—CP低水平表达。 HisA获得重组载体pHis—CML28测序鉴定；将 His—CML28融合蛋白的编码序列定向克隆至 成功培养出具有典型形态特征以及免疫表型特征 IREs双表达载体获得重组载体pCML28一IRES2； 的DC；经电穿孔导入重组质粒pcML28一IRES2 PBMC诱导分化培养获得DC；电穿孔将pCML28 Blot- 一IRES2导人到DC中，RT—PCR、Western后，RT—PcR、WesternBlotting分别证实CML28 mRNA、His ring以及荧光显微镜分别检测CML28 达；不同效靶比进行CFSE—MLR的FACS分析 —CML28融合蛋白、GFP的表达。并评估转染效