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第-1-二届全国动物繁殖学肃讨论会论文1t- 小鼠显微受精研究进展 李强1刘凤军2 (1．山东省畜禽良种推广中心山东．济南250300) (2．西北农林科技大学生物工程研究所陕西杨凌712100) 摘要：小鼠由于很容易获得大量的遗传学信息而成为应用最广泛的实验动物。通过应用小鼠胚 胎开发7大量的先进技术。由于小鼠妊娠和传代时间短。分别为20天和约3个月，所以研究鼠类的 发育和繁殖生物是非常容易的。转基因小鼠的研究与哺乳动物转基因基本上是相关的。然而，在繁 殖I程的某些领域．由于操纵未受精卵母细胞的技术上的困难，，1、鼠模型是不够的。例如，早在20世 inFirst和Prather 纪80年代．A．Ifl成功地在绵羊、牛和兔上应用1显微受精和核移植技术(Revieud 1991；Iritani1991)．但在小鼠上的应用则存在问题。1995年，建立1稳定可靠的显微注射技术．能够 T-同类型的核注入卵母细胞，这极大地扩展1小鼠配子显微操纵的领域。用成熟精子、未成熟精子 1995a)。随着这些早期的技术进步．小鼠的显微受精和核移植技术得到1进一步的发展。1998年，初 能力的小鼠品系。人们期待用核移植技术提高转基因鼠的生产效率和保存有遗传学价值的小鼠品 糸。本文综述1已建立的鼠类繁殖I程技术一一显微受精在生物学和小鼠遗传学的基础研究领域的 价值。 关键词：显微受精核移植细胞质移植繁殖I程技术小鼠 一、显微受精 质直接注射法相比，这些方法更耗时、复杂。直 接注入技术(现在通常指ICSI)对比以前的显微 l小鼠胞质内精子注射(intracytoplasmic sperminiection，ICSl)的研究进展 受精技术有几个优点：不仅简化了技术、提高了 受精效率．而且用于受精的精子细胞的范围也变 1976年．Uehara和Yanagimachi尝试了哺 乳动物卵母细胞的显微受精。他们的研究表明， 得更广泛了。再后来，未成熟精子细胞(生精细 在大鼠的卵胞质中注入同(物)种的精子后，能形 胞)或完全不能游动精子的ICSI能像正常精于 成雄原核。小鼠的显微受精技术是在20世纪 一样使卵母细胞受精。第1次可靠应用ICSI的 80年代建立起来的，主要是透明带切开法和卵 关键是采用了压力驱动的显微操作系统把精子 周隙注入法(Iritani，1991)。尽管用这些方法受 精的卵母细胞经常能发育到2细胞期，但与卵胞 安全地注入卵母细胞质而没有损伤受体卵母细 一16一 第-I二届全国动物繁殖学术Ca论会论文集 胞。尽管最初为了提高注核卵母细胞的存活率． 有同成熟精子相同的单倍体染色体，所以球形精 显微操作的温度设定在17一18℃，而现在大体子是理想的配子替代物。然而，与成熟精子不同 上都是在室温下进行(Kimura和Yanagimachi．的是，小鼠球形精子细胞没有激活卵母细胞的能 1955b)。卵母细胞存活率能达70—95％且大部 分能受精形成两个原核。受精卵能否发育到囊 电脉冲进行人工激活。当前，球形精子的显微受 胚和分娩主要取决于卵母细胞的物种(Kawase精方法有两种，它们按注核和激活时间不同而有 等，2001)、精子的状况及操作者的技术。在杂交所区别。最常用的方法是先激活卵母细胞。然后 1代(F1)，如果用新复原精子注射，并由技术水注入第二次减数分裂末期的球形精子(Kimura 平高的操作者来操作的话，ICS[的效率与IVF 相当。 精子细胞注入MⅡ期卵母细胞以使精子发生早 小鼠卵母细胞在受精期间中心体运动与其 期染色体凝集(Ogura等．1999)，lh后，在