鸭疫里默杆菌mazp基因克隆表达及免疫原性分析.pdfVIP

动物医学进展 。2015，36(2)：44—47 ProgressinVeterinaryM edicine 鸭疫里默杆菌 mazp基 因克隆表达及免疫原性分析 王秀祯，罗永芳，夏文君，罗雪刚，彭少静，周 念，李继祥 (西南大学荣 昌校区动物医学系，重庆 40246O) 摘 要：为探索鸭疫里默杆菌不同血清型菌株的共 同保护性抗原，克隆表达 mazp基 因，并采用动物试 验测定表达蛋 白的免疫原性。根据 RA—GD株 mazp基 因核苷酸序列设计特异性 引物进行 PCR扩增 ，克隆 测序获得 RA—AF株细菌 1326bp的核苷酸片段 ，比较分析发现其保守性高。以克隆的mazp基 因构建重组 表达质粒pET-32a—mazp并转化E．coliBL21(DE3)，IPTG诱导获得重组蛋 白。重组蛋 白为免疫抗原免疫 小鸭 15d后 ，RA—BSY(血清 1型)和 RA—AF(血清 2型)攻毒 的保护指数分别为 77．8和 62．4；抗血清能延 迟发病和死亡时间。结果表明，鸭疫里默杆茵mazp蛋白具有免疫原性，免疫鸭对血清 1型和 2型RA感染 具有抵抗力。 关键词 ：鸭疫里默杆菌；mazp基 因；免疫原性 ；保护指数 中图分类号 ：Q785；$852．617 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2015)02—0044—04 鸭疫里默杆菌 (Riemerellaanatipestifer，RA) 株细菌抗血清、RA—AF株 肉汤培养物无菌滤液 鼠抗 是一种不运动、无芽胞的革兰阴性菌 ，主要感染 2周 血清由西南大学荣 昌校区兽医公共卫生研究室保 龄～8周龄鸭，病死鸭以纤维素性心包炎、肝周炎及 存 ；pMD19一TVector、PCR试剂、DNA 胶 回收和 气囊炎为主要特征口]。该菌是当前危害养鸭业最重 DNA连接试剂盒为宝生物工程 (大连)有限公司产 要的病原菌之一 ，可使鹅、火鸡、鸡 等多种家禽及 品；His—Bind树脂为德国Merck公司产品；Western 野鸟感染发病。RA全基 因组序列分析发现 ，有多 blot试剂盒为加拿大 BioBasic公司产 品。5日龄 、 种胞外蛋 白酶基因且菌株 间高度保守 ]。胞外蛋 12Ft龄花边鸭 由重庆永健生物技术有限公司实验 白酶作为病原性细菌的重要毒力因子 ，具有溶组织 、 动物基地提供 。 抗吞噬和促进细菌扩散等多种作用，是多种细菌的 1．2 方法 保护性抗 原之 一，且 不具有血清 型特异性_l6]。 1．2．1 mazp基 因的克隆 参照 GenBank已发表 Pathanasoph0nP等[g]发现 ，RA 肉汤培养物 的无菌 的RA—GD株 mazp基因核苷酸序列(CP002562．1)， 滤液 (铝胶佐剂)可 以诱导小鸭获得对攻毒的保护； 利用引物设计软件设计 1对上 、下游 引物 (P1：5，_ GGATCCGATTTGTTAACCCAAAT一3 ，P2：5一 我们在前期进行 比较基 因组学研究中发现，自然弱 AAAGCTTAATGTCACTTCCAATAATGAG一 毒 RA—DY9株_l】。。缺失胞外蛋 白酶 membrane—asso- 3)，在上、下游 引物 的 5端分别 引入 BamH 工和 ciatedzincmetalloprotease(mazp)基 因 (资料未发 HindⅢ酶切位点，预计扩增片段大小为 1326bp左 表)。为探索 RA各血清型菌株共 同的保护性抗原 ， 右，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合 本研究对鸭疫里默杆菌胞外蛋 白酶基因mazp进行 成 。 原核表达，并通过动物试验测定表达蛋 白的免疫原 按照参考