鹅肌球蛋白重链1基因MyHC1全长cDNA克隆、序列及胚胎期表达特征分析.pdfVIP

一 委釜I- system：http：llWW 囊●璧■穗■■■ …Onlniesystem：http：w／w／茹wWljjaabbooiitteecchhoo．rrgggy 昂疆 魁 鹅肌球蛋 白重链 1基因MyHC1全长cDNA克隆、序列及胚胎期表达 特征分析 李艳艳 邵芳 吴小娟2 石亦静 郁建锋。顾志 良 l苏州大学基础医学与生物科学学院，苏州 215123；2常熟理工学院生物与食品工程学院，常熟 215500；3南京医科大学 附属常州市第二 人民医院肿瘤科，常州 213003 通讯作者，zhilianggu88@hotmail．CO1TI 摘 要 肌球蛋白是组成肌原纤维粗丝的主要成分，在肌肉生长发育和运动收缩过程起重要作用。本研 究采用反转录PCR和快速扩增cDNA末端(rapidamplificationcDNAends，RACE)方法，从太湖鹅anser anser)肌肉中克隆到肌球蛋白重链 1基因(myosinheavychain1，MyHC1)的全长cDNA，并运用生物信息学 的方法对其进行分析，实时荧光定量PCR(Real—timefluorescentquantitativePCR，qRT-PCR)检测MyHC1基 因在鹅胚胎期的表达情况 。研究结果表 明，鹅MyHC1基因(GenBank登录号：KM675469)cDNA全长6 028bp，包含5823bp的开放性阅读框，57bp的5’端非编码区和 148bp的3’端非编码区，共编码 1940个氨 基酸 。经预测，鹅MyHC1基因编码 的蛋 白质 由31478个原子组成，分子式为C。H 7N O S，相对分 子质量为223kD，等 电点为5．62，平均亲水性为一0．786，属于不稳定亲水蛋 白。在线预测鹅和鸡(Callus gallus)的MyHC1蛋 白质三维结构呈高度相似 ，由多螺旋和折叠片聚集成球状头部，并带有长纤维状0一【螺 旋尾部。鹅MyHC1的编码区(codingsequence，CDS)序列与鸡的同源性最高，为92．86％，与哺乳类同源性 多数在84％左右，与两栖类同源性相对较低。鹅与鸡氨基酸同源性最高，为96．45％，与哺乳类的同源性 多数在90％左右，与非洲爪蛙(Xenopuslaevis)同源性较低，为78．13％。系统进化树分析表明，哺乳动物形 成一个大分支，两栖类 自成一支，鹅和红原鸡聚成一支，分子进化地位的关系最近 ，验证了鹅和鸡属于近 缘物种 。qRT-PCR检测到MyHC1基因在胚胎期第7天开始表达，以后表达量逐渐升高，在15d表达量达 到高峰后下降，25d之后逐渐趋于平稳，表 明，MyHC1基因在鹅胚胎期mRNA水平的表达量呈先上升再 下降的趋势。本研究首次获得了鹅MyHC1的全长cDNA序列、分子的结构特点和表达特征，显示该基因 在鹅肌 肉生长发育过程起重要作用，为该基因的功能及鹅肉质性状研究提供 了基础资料。 关键词 鹅，肌球蛋 白重链 I(MyHC1)，胚胎期，组织表达分析 M olecular Cloning， Sequence and EXxolresslon Charaacctteerrlizzaattlio0nn of ， 一 一 Myosin Heavy Chain 1Gene (MyHC1)inGoose Anseranser)at EmbryonicPeriod LIYan—Yan SHAOFang WUXiao—Juan。 SHIYi—Jing YU Jian—Feng GUZhi—Liang2 1CollegeofBasicMedicineandBiologicalScience，Soochow University,Suzhou215123，Ch