野西瓜正丁醇萃取物对HepG2细胞线粒体膜电位和%5bCa2%2b%5di的影响.pdfVIP

·216· ChineseTraditionalandHerbal 中草菊 Drugs第40卷增刊2009年 野西瓜正丁醇萃取物对HepG2细胞线粒体膜电位禾IECa2+]；的影响 季宇彬1’2”，刘光达h2，于蕾1’2”，李海娇1’2，杨海帆1’2，庞琳琳1’2 (1．哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，黑龙江哈尔滨150076；2．哈尔滨商业大学药物研究所博士后 科研工作站，黑龙江哈尔滨150076；3．国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，黑龙江哈尔滨150076) 摘 要：目的 研究野西瓜正丁醇萃取物诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的机制，观察其对HepG2线粒体膜电 位和细胞内Ca2+浓度Eta”]．的影响。方法经流式细胞仪观察野西瓜正丁醇萃取物对线粒体膜电位的影响；激 野西瓜正丁醇萃取物可 光共聚焦显微镜检测野西瓜正丁醇萃取物作用前后，HepG2细胞ECa”]t的变化。结果 不同程度降低HepG2细胞线粒体跨膜电位，此外，中、高剂量的野西瓜正丁醇萃取物还可以显著升高Eta2+]；，造 成钙稳态平衡。结论野西瓜正丁醇萃取物降低线粒体膜电位，开放MPTP孔道，造成细胞内Ca2+超载，诱导 HepG2细胞凋亡。 关键词：野西瓜；人肝癌HepG2细胞；细胞凋亡；膜电位；Ca”浓度 L．是维吾尔族民间 1．3 流式细胞仪检测HepG2细胞线粒体膜电位： 野西瓜Capparisspinosa 常用药，又名刺山柑、槌果藤，为白花菜科山柑属植 将2×105个对数生长期细胞接种于6孔培养板，置 物，具有祛风、除湿、通鼻窍、止瘀消肿、止痛活血的 于37℃、5％CO。培养箱中；24h后加入不同质量 功效，外敷患处治风湿性关节炎和疮毒[1’2]。本课浓度的药物；阳性对照组加阿霉素，其终质量浓度为 h 题组前期研究发现，野西瓜中含有皂苷类成分，并且 2．5“g／mL；阴性对照组加相同体积的培养基；24 野西瓜正丁醉萃取物在体外具有显著抗肿瘤活性， 后用胰蛋白酶消化细胞，PBS洗2次，分别加入终 MTT结果显示其IC5。为46．16／19／mL[3]，经PI单 000 染流式细胞仪检测，发现野西瓜正丁醇萃取物可以 育30rain，离心(2r／rain，10min)，用PBS洗 诱导HepG2细胞凋亡。本实验在前期研究的基础2次，再用300目尼龙网滤过后以流式细胞仪检测 nm，发射 上，通过观察线粒体膜电位和细胞内Ca2+浓度细胞荧光强度。检测条件：激发波长488 波长525nm。实验重复3次。 ([Ca2+]i)，来阐明野西瓜正丁醇萃取物诱导 HepG2凋亡的初步机制。 1材料与方法 培养板内放上盖玻片，取对数生长期细胞接种于6 1．1 细胞系：人肝癌细胞系HepG2由哈尔滨商业孔培养板中，细胞浓度为2×105个／mL，置于 大学生命科学与环境科学研究中心药物研究所细胞 37℃、5％CO。培养箱中，24h后加入不同质量浓度 的药物；阳性对照组加阿霉素，其终质量浓度为2．5 培养室传代保种，于含10％小牛血清的RPMI 1640培养基，置于37℃、5％COz培养箱培养。“g／mL；阴性对照组加相同体积的培养液；药物作用 1．2药物及试剂：野西瓜果实购于新疆野西瓜开发 24h后吸出培养皿中的培养液，加胰酶消化，用无 部；野西瓜正丁醇萃取物由哈尔滨商业大学药物研