血糖含量的测定.pptVIP

一 实验目的 1、掌握无蛋白血滤液 2、血糖测定的原理和方法 二 实验原理 1.无蛋白血滤液的制备 血液中所含的蛋白质常影响其他成分的测定，可以采用钨酸法除去蛋白质，制备无蛋白血滤液，供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素等测定使用。 钨酸钠与硫酸混合生成钨酸。在pH值小于等电点的溶液中，钨酸与血液中的蛋白质分子的阳离子形成不溶性的蛋白沉淀，沉淀过滤或离心，上清液即为无色、透明、pH值约为6的无蛋白滤液。 2.血糖测定 葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物，具有还原性，与碱性铜试剂混合加热， 葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧 [suō] 基，而铜试剂中的二价铜被还原成砖红色的氧化亚铜沉淀。氧化亚铜可以使磷钼[mù]酸还原成钼蓝，使溶液成蓝色。其生成蓝色的深度与血滤液中葡萄糖浓度成正比。通过分光光度计比色，即可求出血糖的含量。 三 实验器材 仪器 ：锥形瓶；试管及试管架；离心机；电炉；血糖管；奥氏吸管；分光光度计。 试剂：动物全血；1／3mol·Ｌ　硫酸溶液；碱性铜试剂；磷钼酸试剂；0.25％苯甲酸溶液；葡萄糖应用标准溶液0.1mg·mL －１ －１ 四 实验步骤 1.无蛋白血滤液的制备 吸取充分均匀的抗凝血1mL，擦净管外血液，缓慢放入锥形瓶或试管中。加入蒸馏水7mL，混匀，使完全溶血。加入0.33mol·L 硫酸溶液1mL，充分混匀。此时血液由鲜红色变为棕色，静置5~10min，使其酸化完全。加入10%钨酸钠溶液1mL，边加边摇。当摇到不再产生泡沫时为止。说明蛋白质已经完全变性沉淀。放置5~10min，过滤或离心出去沉淀，既得无蛋白滤液（每毫升相当于1/10全血） －１ 2. 血糖测定 取3支血糖管按下表操作： ? 血糖管 空白管 标准管 测定管 无蛋白血滤液 蒸馏水 葡萄糖应用标准溶液 碱性铜试剂 — 2.0 — 2.0 — 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 — 2.0 混匀，同时放入100℃沸水裕中煮8min，取出置冷水中冷却3min（切勿摇动血糖管） 磷钼酸试剂 2.0 2.0 2.0 混匀后放置2min（使二氧化碳气体逸出） 蒸馏水加至 25 25 25 试剂/mg 用蒸馏水加至25刻度处后，混匀，空白管调零，在波长420nm处比色，记录各管光密度。计算求出每100mL血液中葡萄糖的质量（mg） 计算公式： 样品中的血糖（mg/100mL）=（测定管光密度/标 准管光密度）*0.1*100/0.1 = （测定管光密度/标准管光密度）*100 五 注意事项 一定要等水沸后，再放血糖管。准确加热8min，时间过久则呈色较深，反之则浅，均影响结果的准确性。为避免还原生成的亚铜被空气中的氧再氧化，冷却时切勿摇动血糖管。 六.记录表。