差异蛋白质组学技术及其在畜牧兽医应用.pdfVIP

●第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会 论文集 -蟹“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛 畜牧学部分·遗传育种 差异蛋白质组学技术及其 出 在畜牧兽医中的应用 肖海峻，曹授俊，孟利前．杨新建，王伟青，田璐 (北京农业职业学院，北京102442) 摘要：蛋白组学是后基因组时代的一个重要组成部分，差异蛋白质组学旨在依据样本在不同状态或 不同外界条件作用下所表达的蛋白质的不同来达到鉴定、筛选蛋白质的目的，寻找差异位点，绘制差 异蛋白质谱．本文综述了差异蛋白组学的定义、蛋白质分离方法及各自优缺点、蛋白质的鉴定及分析 及其差异蛋白组学在在畜牧兽医中的应用， 关键词：蛋白质组学；差异蛋白质组学；畜牧；兽医 1 蛋白组学与差异蛋白组学的概念 蛋白质组学是研究细胞内全部蛋白质的存在与行为方式 其特点： 的一门学科．是后基因组研究中最主要的部分，是从整体上对 2．2．1 双向凝胶电泳技术(2一DE) 体系内蛋白质进行研究…。差异蛋白质组学是以重要生命 双向凝胶电泳技术是等电聚焦电泳和sDs—PAGE的组 过程或人类重大疾病为对象，进行重要生理和病理体系或过 合，即在第一项等电聚焦电泳中。根据等电点的不同进行蛋白 程蛋白质表达的比较，通过各种先进技术研究蛋白质之间的 质分离；在第二项sDs—PAGE电泳中，根据蛋白质相对分子 相互作用，绘制某个体系的蛋白质作用的网络图谱¨]。由此 量的大小再次进行分离。该技术常和质谱技术结合进行蛋白 可见，差异蛋白组学主要是筛选和鉴定不同种类或状态下各 质定量鉴定，是差异蛋白质组学研究的重要手段之一。该方 法的优点是可根据凝胶上点的图形变化比较蛋白质组的变 样本之间蛋白质组的区别与变化，通过对差异蛋白质的分析 化，从而找出差异蛋白．缺点是重复性差，不太适合于某些疏 鉴定可以研究编码该差异蛋白的基因，扩展对该基因功能的 水性蛋白质，此外，检测不出低丰度蛋白质”1。 了解，也可结合功能蛋闩质组学研究，甚至发现新的蛋白质， tw0 近年来发展的荧光双向差异凝胶电泳(兀uorescence 完善已有蛋白质组数据库。 dimensiDnaldi噩rennal 2差异蛋白质组学的研究方法 比较的蛋白质样品经不同荧光染料(cy2、cy3、cy5)标记后， 差异蛋白质组学的研究方法包括样品的制备、蛋白质的 等量混合进行双向电泳．蛋白量差异可通过蛋白点不同荧光 分离、鉴定和生物信息学。 信号间的比率来决定。该技术优点是荧光染料灵敏度高．所 2．1样品制备技术 需样品量非常少，在一张胶上可同时分析3个样品．且重复性 样品制备是蛋白质组学研究的首要步骤，其目是尽可能 好，提高了分析通量哺J。 去除样品中非蛋白物质，最大可能的提取全部蛋白质。合理 2．2．2 chnD． 高效液