应用LC-MS对母乳化奶粉中非变性乳清蛋白(Bα-Lactalbumin+Bβ-Lactoglobulin)的定量方法的研究.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 K．B02 Bp— Lactoglobulin)的定量方法的研究 蔡增轩 储小军 黄百芬 林晓 任一平 浙江省疾病预防控制中心 杭州 关键词：LC．MS，乳清蛋白，同位素内标法 l 引言 最近有人提出a．乳白蛋白是母乳乳清蛋白中的主要蛋白质之一，从婴儿配方食品的母乳化角度 考虑开始强化容易得到的牛a--gL白蛋白(Bovinea．La)。 BD—Lg)、蛋白酶．胨、牛血清白蛋白和免疫球蛋白等。其中Bp．Lg是牛乳清蛋白中主要蛋白质(占48 ％)g。牛乳中的B0【哥L白蛋白是乳清蛋白中耐热性最稳定的一种，但牛乳中含量有限，仅含19％左 右。 相液相色谱、凝胶色谱法和液相色谱质谱联用法。新近儿年发展的HPLC．ESI．MS联用技术可同时获 得高效率的分离和高灵敏的检测结果。UPLC具有极高分离能力，1．7p,m的超小填料颗粒半径，以及 电荷离子，在液相分离溶剂同定前提下，所产生的多电荷离子表现出相当稳定的重复性，这给选择 对较高丰皮的多电荷离子进行区间扫描提供了方便。当对该多电荷离子进行选择质量区间扫描检测 时，可在尽可能避免噪音干扰的同时，获得对蛋白质的高灵敏的响应，从而得剑稳定的、高灵敏度 应用UPLC．ESI—MS检测技术进行准确的定量检测是本研究的主要内容。 2实验结果与总结 本实验样牖经过溶解，调节pH，离心沉淀，稀释，过滤等简单的预处理，采取WatersACQUITY UPLCBEH300C18柱(2．1×150mm，粒径1．7 形尖锐，分离效果明显。 为选择lx．间扫描的相关蛋白质的总离子流图。 至今无法找剑理想的与乳清蛋白极为相似或同位素蛋l勺质可作为内标参与对三个乳清蚩F1的定 ％。使J}j0．I％TFA稀释后的人乳经色谱进样分离，质谱伞扫描，得剑的质谱图与牛乳的Ba—La(图 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览舍会议论文集 理想内标物。经对备类样鼎进样检测的结果表明，样品中H叶Lg(内标)通道中的山峰忙簧均术见 有杂质峰出现，住所有的被检样鼎的Ha-Lg通道中均不含有人乳Ha-La。在弄种不同基质的样晶中 对Hd．La不形成明显的干扰，井具有良好稳定性。冈此，本实验选Ⅲ人乳中Hq-La作为内标，采用内 标法同时准确定量Ba-La、Bpb-Lg帛lBB}Lg· ‘ -。]，b。；一；。一一：曼，：。 ’ c。1 一L—F—j}—f—≈·—--—-—?—o=—F—々r—揣—’i——絮一 一L——?——=——=——％——；—’i——；—_j——_—’#—、=—’=—- L——=，—·；：—1·—1=——z——i·——=——R—-=?!；=—j；——x—-ji一．rt a8 幽I标准品的区呵}嘣H(1…La2内标-3 UPLCBEH300 Bb—Lg，4：lh—Lg乜卅柱Watct5ACQu【TY 7um 300AI2l+IOOmmColumn；流动相0I％TFA水，乙HS浒渡．梯胜洗脱) 方泣检出定量限分别可边0103、0108和0．071 m∥g，可满足低含量乳清蛋n样品的检测。经 999，且F0999，¨次重 方法学验证，线性范围为：I～50嵋／mL，三种乳清蛋闩的相关系数r0 经对各种类型的牛乳清蛋白制鼎及婴幼儿配方奶粉定量分析后表明：本方法可咀适川r不同含 量的牛乳乳清粉或婴幼儿配方