一例母猪溷合感染猪蓝耳病病毒和猪丹毒杆菌的实验室诊断.pdfVIP

栏 目协办 一 例母猪混合感染 猪蓝耳病病毒和猪丹毒杆菌 的实验室诊断 李 波，李润成，肖博仁，余兴龙 (湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128) 摘 要：本试验对一猪场疫病进行了实验室诊断以及分离细菌的药物敏感性检测，结果表明该场生猪合并感染了 猪繁殖与呼吸综合征病毒 (猪蓝耳病病毒)和猪丹毒杆菌。该丹毒杆菌对青霉素及几种头孢 喹诺酮类药物敏感 而对卡那霉素、5-．I米卡星、新霉素等不敏感。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征，猪丹毒杆菌，药物敏感性 2010年 7月湖南省某猪场配种舍母 TOYOBO公司 ：PCR试剂购 自北京天 2．1．3 反转录扩增 cDNA 猪发病，体温升至 40℃以上，全身发 根生化科技有限公司 ；厌氧发生袋购 自 将提取的RNA作为模板配置反转 红、呼吸加快、站立困难、急性死亡， 南京一基生化科技有限公司。 录体系，用PCR仪进行反转录。具体 4d内死亡母猪 l2头。采用多西环素治 1．2 待检材料 操作按反转录试剂盒说明书进行。 疗无效。眼观解剖病变可见弥散性间质 来 自湖南省某猪场的母猪血液以及 2．1．4 PCR扩增 性肺炎，肺呈瘦肉样变。脾脏有肿大出 实质脏器。 以反转录扩增的cDNA为模板进行 血、边缘有锯齿状变化、腹股沟淋 巴结 2 方法 PCR扩增。PCR按常规方法进行，反 稍肿大切面有较多渗出液，其他脏器无 2．1 PRRSV的RT-PCR检测 应退火温度为58℃，PCR反应结束后 明显病变。猪群免疫情况为 ：猪瘟、猪 2．1．1 引物合成 取扩增产物 6 L进行琼脂糖凝胶电泳 伪狂犬疫苗、细小病毒疫苗实行跟胎免 参照文献 …合成扩增PRRSV基因 鉴定 。 疫 ；2008年起没有再接种过猪繁殖与呼 的引物 ，引物序列如下 ： 2．2 细菌感染的诊断及药物敏感性 吸综合征病毒 (PRRSV)疫苗。根据临 Fb：CGCGTAGAACTGTGACAA 检测 床症状及解剖病变将该次疫病诊断为疑 CAACG 2．2．1 细菌的分离培养 似 pRRSV感染并继发了其他细菌侵入 Rp：GACARGGAGCTGCTTGAT 用接种环无菌钩取脾、肝、淋巴结 机体。笔者从 3头发病高热期母猪采集 GACAC 以及肺脏组织接种普通营养琼脂培养 血液并于 1头母猪解剖后采集实质脏器 引物扩 增特异性 目的片段长度为 基，每一种脏器接种 2个平板 ，1个平 进行了实验室诊断。现将结果报告如下： 2l8bp。 板放到37℃温箱进行有氧培养，1个平 1 材料 2．1．2样品总RNA 的提取 板放于厌氧罐 内，并于罐 内放好厌氧发 1．1 主要试剂 取 3头发病母猪血液及 1头发病母 生袋，然后再将厌氧罐密封放于 37℃ TrizolReagent购 自Invitrogen公 猪的肺脏、淋巴结 50～100mg分别按 温箱进行厌氧培养，48h后将长出的细 司 ：FristStrand SynthesisKit购 自 常规方法提取总RNA。 菌进行涂片，革兰氏染色镜检。 2．2．2 细菌的PCR鉴定 基金项 目：国家科技支撑计划 (2006BAD06A00) 1)引物合成。参照文献 合成 通讯作者 ：余兴龙