再生型两水相体系的构建应用.pdfVIP

再生型两水相体系的构建与应用∗∗ 曹学君∗ 生物反应器工程国家重点实验室，华东理工大学，上海 200237 摘要：两水相体系在应用中存在的关键问题是相体系回收困难。由于生产成本及降 低污染的原因, 用过的相体系需要回收和重复使用。过去几十年这方面未能突破,从 而妨碍了这一技术的应用。因此，急需要研制出能大规模重复循环使用且具有生物 相容性的两水相体系。课题对常用聚合物单体根据电性、疏水性、亲水性、光、热 及 pH 敏感性进行分子作用力的分析，对单体配比进行优化调控，通过共聚反应， 共制备出8 种光、热和pH 敏感可回用聚合物，这些聚合物可形成6 个两水相体系， 其中有4 个两水相体系中两个成相聚合物均能通过光、pH 或热实现回用。将上述两 水相成相聚合物用于蛋白质、氨基酸等生物分子的分离，以及酶催化反应，均能达 到天然聚合物相同的分离效果。这些聚合物在使用后通过光、热、pH 手段进行回收， 其回收率在 95-99%，根据理论计算，可反复回用60 次以上。聚合物合成及回用成 本低，条件温和，易于再生操作，环境友好等优点。在生物分离工程与生物反应工 程中具有广阔的应用前景。 关键词：两水相体系；光敏感共聚物；pH 敏感共聚物；热敏感共聚物；生物分离 1 两水相的发展现状 两水相 (又称双水相) 体系一般是将水中加入两种高聚物，或一种高聚物和一 种无机盐经混合所形成的两相体系。两水相具有的性质使它适合于萃取生物分子或 用于酶催化反应[1]。两水相的发现已有50 多年的历史。有关两水相用于蛋白质、 核酸、病毒、抗生素、有机酸、氨基酸、天然产物等生物产品的分离、生物转化及 生物分析中的报道层出不穷。 两水相体系在发展中存在的关键问题是相体系回收困难. 由于生产成本及降低 污染的原因, 用过的相体系需要回收和重复使用.过去几十年这方面未能取得突破性 进展，从而妨碍了这一技术的应用。到九十年代,人们找到了热回收的相体系,即氧化 乙烯(EO)与氧化丙烯(PO)无规共聚物组成的热诱导相分离体系[2-6]、可回收挥发性 盐类相体系[7-8]、pH 敏感相体系[9-10]。迄今为止，尚没有成功获得具有应用价值 再生型两水相体系，即形成两相的两种高聚物均可回收，且循环回收率在95% 以上。 总结国内外两水相研究现状，可以明显地看出两水相体系的应用与发展急需要 研制出能大规模重复循环使用且具有生物相容性的两水相体系。我们课题组通过学 ∗∗ 国家自然科学基金资助项目） ∗ 通讯地址： caoxj@ecust.edu.cn 科交叉，在两水相工艺深入研究的基础上，致力于成相聚合物的合成。 2 本实验室的研究工作 我们实验室在90 年代初从事两水相中酶催化方面的研究，经过长期跟踪研究， 深感不解决两水相体系的循环利用问题，这一技术的研究将变得毫无意义。因此， 我们必须着眼长远未来，走学科交叉之路，立志解决两水相的应用问题。在充分总 结前人经验基础上，调整思路，通过近6 年多的研究积累，在再生型两水相成相聚 合物的合成方面取得可喜进展。以可再生成相聚合物合成为主要研究内容，共成功 合成3 种光敏再生型两水相成相聚合物、3 种pH 敏感再生型两水相成相聚合物和1 种热敏性两水相成相聚合物。这些聚合物能与天然的聚合物或另外的聚合物相互间 能形成两水相体系。我们共获得6 个再生型两水相体系，其中有4 个两水相体系均 是由我们合成的聚合物相互构建的，做到了两水相中的两个成相聚合物都能回收， 且多次反复使用的平均回收率均在 95% 以上。其相体系回收的工艺路线如图 1。这 些相体系经蛋白质、氨基酸及有机酸的生物分离分配实验及生物酶相转移催化实验， 均显示了优越的应用前景。以下就所合成的再生型聚物分别作以介绍。 图 1 两水相体系聚合物回用工艺路线 两水相体1 （PNBC-Dextran 20000 ） 起初，作为研究工作的开始，我们以异丙基丙烯酰胺（NIPA ）、丙烯酸丁酯(BA)、 叶绿酸铜钠(CHL)为单体，采用无规共聚法合成了线性光敏感聚合物 PNBC ，探讨了 该聚合物水溶液的热、光回收情况，回收率高达97 ％以上。是首例合成光敏感可再 生两水相成相聚合物[11-12]。见图2